Faktori Xa inhibiitorid (fondapariinuks, rivaroksabaan, apiksabaan)

1. Toimemehhanism: fondapariinuks on sünteetiline pentasahhariid, mis seondub antitrombiiniga; rivaroksabaan, apiksabaan ja edoksabaan (ei ole registreeritud Venemaa Föderatsioonis) - inhibeerivad faktorit Xa ilma antitrombiini osalemiseta.

2. Antikoagulandi toime jälgimine ei ole vajalik. Pärast 2–4 tundi pärast rivaroksabaani võtmist (apiksabaani võtmine annab nõrgema toime) on enamikul patsientidel täheldatud protrombiiniaja suurenemist (INRi automaatne arvutamine võib olla> 2), samuti APTT (tavaliselt kuni 50 s); trombiini aeg jääb normaalsesse vahemikku (erinevalt dabigatraanist). Kui on vaja teha erakorralist operatsiooni, millel on suur verejooksu oht, tuleb määrata protrombiini aeg (võrdlusväärtuste ületamine näitab antikoagulantide jätkuvat toimet). Rivaroksabaani ja apiksabaani toimet saab hinnata anti-Xa aktiivsuse määramisel, kasutades sobivaid kalibraatoreid (ilma eksogeense antitrombiinita).

3. Vastunäidustused: sama nagu hepariini puhul (välja arvatud HIT), samuti raseduse ja imetamise ajal. Dabigatraan on vastunäidustatud 80-aastase kreatiniini kliirensiga neerupuudulikkuse korral, kasutades amiodarooni või verapamiili, ning mõnel juhul ka neerufunktsiooni langusega patsientidel (GFR 30–50 ml / min). Dabigatraani ja teiste antikoagulantide samaaegne manustamine (välja arvatud UFH tsentraalsete kateetrite loputamiseks kasutatavates annustes), trombotsüütide vastased ained, trombolüütilised ravimid või dekstraanid võivad suurendada verejooksu riski.

Rivaroksabaani annust tuleb vähendada patsientidel, kelle kreatiniini kliirens on 15–49 ml / min või suur verejooksurisk (eriti seedetraktist). Apiksabaani annust tuleb vähendada, kui 2 kolmest kriteeriumist on: vanus> 80 aastat vana, kaal <60 kg ja kreatiniini tase> 133 μmol / l. Vähendada edoksabaani annust isikutel, kelle kreatiniini kliirens on 15-50 ml / min, samuti isikutel, kelle kehakaal on ≤60 kg.

4. Ravimi ärajätmise põhimõtted enne operatsiooni → tabel. 2.34-2. Kui rivaroksabaani või apiksabaani kasutavatel patsientidel on vaja kiiret operatsiooni, kaaluge protrombiinikompleksi (PDA) tegurite kontsentraadi kasutamist. Kui on vaja katkestada Xa-teguri inhibiitor enne operatsiooni, ärge kasutage ajutist ravi hepariiniga, välja arvatud kõrge trombootilise riskiga patsientidel (→ Tabel 2.34-8). Nende ravimite vastuvõtmist võib jätkata pärast 6... 8 tundi pärast operatsiooni, mis on seotud hemorraagiliste komplikatsioonide madala riskiga ja 48–72 tunni pärast kõrge hemorraagiliste tüsistuste tekkimise riskiga..

Antikoagulandid: olulised ravimid

Veresoonte tromboosi põhjustatud tüsistused - südame-veresoonkonna haiguste peamine surmapõhjus. Seetõttu on tänapäeva kardioloogias suur tähtsus veresoonte tromboosi ja embolia (oklusioon) tekkimise ennetamisele. Vere koagulatsiooni kõige lihtsamas vormis võib esitada kahe süsteemi: vereliistakute (verehüüve moodustumise eest vastutavad rakud) ja vereplasmas lahustunud valkude - koagulatsioonifaktorite koostoime all, mille toimel fibriin moodustub. Saadud trombi koosneb trombotsüütide konglomeraadist, mis on segatud fibriinniitidesse.

Verehüüvete tekke vältimiseks kasutatakse kahte ravimirühma: trombotsüütide agregatsioonivastased ained ja antikoagulandid. Trombotsüütide vastased ained inhibeerivad trombotsüütide moodustumist. Antikoagulandid blokeerivad ensümaatilisi reaktsioone, mis viivad fibriini moodustumiseni.

Meie artiklis vaatleme antikoagulantide peamisi rühmi, nende kasutamise näidustusi ja vastunäidustusi, kõrvaltoimeid.

Klassifikatsioon

Sõltuvalt kasutuskohast eristatakse otsese ja kaudse toimega antikoagulante. Otsesed antikoagulandid inhibeerivad trombiini sünteesi, pärsivad fibrinogeeni moodustumist veres. Kaudsed antikoagulandid inhibeerivad veres hüübimisfaktorite teket maksas.

Otsesed koagulandid: hepariin ja selle derivaadid, trombiini otsesed inhibiitorid, samuti Xa faktori selektiivsed inhibiitorid (üks vere hüübimisfaktoritest). Kaudsed antikoagulandid hõlmavad K-vitamiini antagoniste.

  1. K-vitamiini antagonistid:
    • Fenindioon (feniliin);
    • Varfariin (warfarex);
    • Acenocumarol (syncumar).
  2. Hepariin ja selle derivaadid:
    • Hepariin;
    • Antitrombiin III;
    • Daltepariin (fragmin);
    • Enoksapariin (anfibra, hemapaksan, clexane, enixum);
    • Nadropariin (fraxipariin);
    • Parnapariin (Fluxum);
    • Sulodeksiid (Angioflux, Wessel Due f);
    • Bemipariin (Cybor).
  3. Otsesed trombiini inhibiitorid:
    • Bivalirudiin (angiox);
    • Dabigatraaneteksilaat (Pradax).
  4. Xa-teguri selektiivsed inhibiitorid:
    • Apixaban (Eliquis);
    • Fondapariinuks (arixtra);
    • Rivaroksabaan (xarelto).

K-vitamiini antagonistid

Kaudsed antikoagulandid on trombootiliste tüsistuste ennetamise aluseks. Nende tabletivormi võib ambulatoorselt võtta pikka aega. On tõestatud, et kaudsete antikoagulantide kasutamine vähendab trombembooliliste tüsistuste (südameatakk, insult) esinemissagedust kodade virvenduse ajal ja kunstliku südameklapi olemasolu.

Feniliini ei kasutata praegu, kuna on suur oht kõrvaltoimete tekkeks. Sincumaril on pikaajaline toime ja see koguneb kehasse, mistõttu seda kasutatakse harva ravi raskuse tõttu. K-vitamiini antagonistide grupi kõige levinum ravim on varfariin.

Varfariin erineb teistest kaudsetest antikoagulantidest selle varase toime tõttu (10–12 tundi pärast allaneelamist) ja kõrvaltoimete kiirest lõpetamisest väiksemate annuste või ravimi ärajätmise korral.

Toimemehhanism on seotud selle ravimi ja K-vitamiini antagonismiga. K-vitamiin on seotud teatud vere hüübimisfaktorite sünteesiga. Varfariini mõju all on see protsess häiritud.

Venoossete verehüüvete tekke ja kasvu vältimiseks on ette nähtud varfariini määramine. Seda kasutatakse kodade virvenduse pikaajaliseks raviks ja intrakardiaalse trombi juuresolekul. Nendes tingimustes suureneb märkimisväärselt südameinfarkti ja insultide oht, mis on seotud eraldatud trombidega veresoonte ummistumisega. Varfariini kasutamine aitab vältida neid tõsiseid tüsistusi. Seda ravimit kasutatakse sageli pärast müokardiinfarkti, et ennetada koronaarset katastroofi.

Pärast proteesi südameklappe on varfariini võtmine vajalik vähemalt mitu aastat pärast operatsiooni. See on ainus antikoagulant, mida kasutatakse verehüüvete tekke vältimiseks kunstlikes südameklappides. Selle ravimi pidev võtmine on vajalik teatud trombofiilia, eriti antifosfolipiidide sündroomi jaoks.

Varfariini on ette nähtud laienenud ja hüpertroofilisteks kardiomüopaatiateks. Nende haigustega kaasneb südame süvendite laienemine ja / või selle seinte hüpertroofia, mis loob eeldused intrakardiaalse trombi moodustumiseks.

Varfariiniga ravimisel on vaja hinnata selle efektiivsust ja ohutust, jälgides INR - rahvusvahelist normaliseeritud suhet. Seda näitajat hinnatakse iga 4–8 nädala järel. Ravi taustal peaks INR olema 2,0 - 3,0. Selle näitaja normaalväärtuse säilitamine on ühelt poolt verejooksu ennetamise ja teiselt poolt vere hüübimise suurenemise seisukohalt väga oluline.

Mõned toidud ja maitsetaimed suurendavad varfariini toimet ja suurendavad verejooksu ohtu. Need on jõhvikad, greibid, küüslauk, ingverijuur, ananass, kurkum ja teised. Nõrgestage kapsas, Brüsseli idu, hiina kapsas, peet, petersellit, spinatit, salatit sisaldavate ravimite aine antikoagulantne toime. Varfariini võtvad patsiendid ei saa nendest toodetest keelduda, vaid võtavad neid regulaarselt väikestes kogustes, et vältida ravimi äkilisi kõikumisi veres.

Kõrvaltoimed on verejooks, aneemia, lokaalne tromboos, hematoom. Närvisüsteemi aktiivsust saab häirida väsimuse, peavalu, maitsehäirete tekkega. Mõnikord esineb iiveldust ja oksendamist, kõhuvalu, kõhulahtisust, ebanormaalset maksafunktsiooni. Mõnel juhul on nahk kahjustatud, varvaste purpurvärv, paresteesiad, vaskuliit ja jäsemete külmakindlus. Allergiline reaktsioon võib tekkida sügeluse, urtikaaria, angioödeemi vormis.

Varfariin on raseduse ajal vastunäidustatud. Ravimit ei tohi määrata ühegi seisundi korral, mis on seotud verejooksuga (trauma, kirurgia, siseorganite haavandid ja nahk). Ärge kasutage seda aneurüsmide, perikardiidi, infektsiooni endokardiidi, raske hüpertensiooni korral. Vastunäidustuseks on laboratooriumi ligipääsmatuse või patsiendi isiksuseomaduste (alkoholism, organisatsiooni puudumine, seniilne psühhoos jne) tõttu piisava laborikontrolli võimatus.

Hepariin

Üks peamisi vere hüübimist takistavaid tegureid on antitrombiin III. Frakteerimata hepariin seondub sellega veres ja suurendab selle molekulide aktiivsust mitu korda. Selle tulemusena pärsitakse veresoonte moodustumisele suunatud reaktsioone veresoontes.

Hepariini on kasutatud rohkem kui 30 aastat. Varem manustati seda subkutaanselt. Arvatakse, et fraktsioneerimata hepariini tuleb manustada intravenoosselt, mis hõlbustab ravi ohutust ja efektiivsust. Subkutaanseks manustamiseks on soovitatav kasutada madala molekulmassiga hepariine, mida käsitleme allpool.

Hepariini kasutatakse kõige sagedamini ägeda müokardiinfarkti trombembooliliste tüsistuste vältimiseks, sealhulgas trombolüüsi ajal.

Laboratoorne kontroll hõlmab aktiveeritud osalise tromboplastiini hüübimisaja määramist. Hepariini ravi taustal 24–72 tunni pärast peaks see olema 1,5–2 korda suurem kui esialgne. Samuti on vaja kontrollida vereliistakute arvu veres, et mitte unustada trombotsütopeenia arengut. Tavaliselt kestab hepariinravi 3-5 päeva, vähendades järk-järgult annust ja edasist tühistamist.

Hepariin võib põhjustada hemorraagilist sündroomi (verejooks) ja trombotsütopeeniat (vereliistakute arvu vähenemine veres). Pikaajalisel kasutamisel suurtes annustes on alopeetsia (alopeetsia), osteoporoosi ja hüpoaldosteronismi tekkimine tõenäoline. Mõnel juhul esineb allergilisi reaktsioone, samuti alaniini aminotransferaasi taseme tõusu veres.

Hepariin on vastunäidustatud hemorraagilise sündroomi ja trombotsütopeenia, maohaavandi ja kaksteistsõrmiksoole haavandi, kuseteede verejooksu, perikardiidi ja ägeda südame aneurüsmi korral.

Madala molekulmassiga hepariinid

Deparepariin, enoksapariin, nadropariin, parapariin, sulodeksiid, bemipariin saadakse fraktsioneerimata hepariinist. Need erinevad viimasest väiksema molekuli suurusega. See suurendab ravimite ohutust. Tegevus muutub pikemaks ja prognoositavamaks, mistõttu väikese molekulmassiga hepariinide kasutamine ei vaja laboratoorset kontrolli. Seda saab teha fikseeritud annustega - süstalde abil.

Madala molekulmassiga hepariinide eeliseks on nende efektiivsus subkutaanselt manustatuna. Lisaks on nende kõrvaltoimete risk oluliselt väiksem. Seetõttu asendavad hepariini derivaadid praegu hepariini kliinilisest praktikast.

Madala molekulmassiga hepariine kasutatakse trombembooliliste tüsistuste vältimiseks kirurgiliste operatsioonide ja sügava veenitromboosi ajal. Neid kasutatakse patsientidel, kes on voodipesu all ja neil on suur oht selliste tüsistuste tekkeks. Lisaks on need ravimid laialdaselt kirjutatud ebastabiilse stenokardia ja müokardiinfarkti jaoks.

Selle rühma vastunäidustused ja kõrvaltoimed on samad, mis hepariinil. Siiski on kõrvaltoimete tõsidus ja sagedus palju väiksem.

Otsesed trombiini inhibiitorid

Otsene trombiini inhibiitorid, nagu nimigi viitab, inaktiveerivad otse trombiini. Samal ajal inhibeerivad nad trombotsüütide aktiivsust. Nende ravimite kasutamine ei vaja laboratoorset jälgimist.

Trombemboolsete tüsistuste vältimiseks manustatakse bivalirudiini intravenoosselt ägeda müokardiinfarkti korral. Venemaal pole seda ravimit veel kasutatud.

Dabigatraan (pradaksa) on tablettitud aine tromboosi riski vähendamiseks. Erinevalt varfariinist ei toimu see toiduga. Selle ravimi uuringud on käimas, koos püsiva kodade virvenduse vormiga. Ravim on heaks kiidetud kasutamiseks Venemaal.

Xa faktori selektiivsed inhibiitorid

Fondapariinuksi seondub antitrombiin III-ga. Selline kompleks inaktiveerib intensiivselt X-faktorit, vähendades trombi moodustumise intensiivsust. Ta nimetatakse subkutaanselt ägeda koronaarsündroomi ja veenitromboosi, sealhulgas kopsuembooliaks. Ravim ei põhjusta trombotsütopeeniat ega põhjusta osteoporoosi. Laboratoorne kontroll selle turvalisuse üle ei ole vajalik.

Fondapariinuks ja bivalirudiin on eriti näidustatud patsientidele, kellel on suurenenud verejooksu oht. Vähendades verehüüvete esinemissagedust selles patsientide rühmas, parandavad need ravimid oluliselt haiguse prognoosi.

Fondapariinuksit soovitatakse kasutada ägeda müokardiinfarkti korral. Seda ei saa kasutada ainult koos angioplastiaga, kuna see suurendab verehüüvete riski kateetrites.

Xa faktori inhibiitorite kliinilised uuringud tablettide kujul.

Kõige sagedasemad kõrvaltoimed on aneemia, verejooks, kõhuvalu, peavalu, sügelus, suurenenud transaminaaside aktiivsus.

Vastunäidustused - aktiivne verejooks, raske neerupuudulikkus, ravimi komponentide talumatus ja infektsiooniline endokardiit.

Xarelto: monograafia uuenduslik suukaudne antikoagulant

2. JAGU
XARELTO®: INNOVATIIVNE SUHTES ANTICOAGULANT

Ülevaade

  • Xarelto® on otseselt spetsiifiline selektiivne Xa faktori inhibiitor, mis toimib hüübimiskaskaadi võtmetegurina.
  • Faktor Xa katalüüsib protrombiini konversiooni trombiiniks. Xarelto ® ei oma otsest toimet trombiinile, kuid reguleerib trombiini moodustumist Xa faktori inhibeerimise teel.
  • Erinevalt Xa faktori kaudsetest inhibiitoritest inhibeerib Xarelto® nii vaba kui ka fibriiniga seotud faktorit Xa ja protrombinaasi kompleksi.
  • Xarelto®-l on prognoositav farmakodünaamika ja farmakokineetika.
  • Xarelto ® -il on hea tasakaalu ja riski suhe mitmesugustes annustes.

Xarelto®: otsene Xa faktori inhibiitor

Xarelto ® (rivaroksabaan) on esimene Xa faktori otsene inhibiitor. Ta on üks uue põlvkonna ravimite esindajaid, kes on ette nähtud VTE ennetamise kliinilise vajaduse rahuldamiseks täiskasvanud patsientidel, kes läbisid plaanitud puusa- või põlveliigese asenduse. Xarelto ® on välja töötatud ka patsientidele, kellel on suur kopsuemboolia risk. Xarelto ® on ette nähtud üks kord päevas, üks 10 mg tablett, sõltumata vanusest, soost, etnilisest päritolust või kehakaalust täiskasvanud patsientidel, kes läbivad plaanitud puusa- või põlveliigese asenduse. Annuse kohandamine ei ole vajalik. Ravimi eeliseks on see, et patsiente ei ole vaja ise süstida.

Xarelto ® farmakokineetilised ja farmakodünaamilised omadused on prognoositavad, nagu on näidatud uuringutes, milles osalesid terved täiskasvanud vabatahtlikud ja täiskasvanud patsiendid, kellele tehti plaaniline puusa- või põlveliigese asendus 42. Xarelto® imendub kiiresti, mis annab kiire toime alguse. Maksimaalne plasmakontsentratsioon (C. Tmax) saavutatakse 2-4 tunni jooksul pärast suukaudset manustamist. Xarelto® absoluutne biosaadavus 10 mg annuses on kõrge (80-100%) 43. Lõplik poolväärtusaeg on keskmiselt 7-11 tundi.

II faasi uuringute tulemuste põhjal on optimaalse annuse määramiseks leitud, et Xarelto®-l on lai terapeutiline koridor: antikoagulandi toime alguse ja verejooksu tekkimise vahel on suur annusevahemik 44-46.

Hüübimise ja trombotsüütide arvu praegust kontrolli ei ole vaja. Lisaks on Xarelto®-l soodne interaktsiooniprofiil (vt lõik 5), seda võib kasutada söögi ajal või tühja kõhuga 43.47.

Toimemehhanism Xarelto®

Xarelto ® on otseselt spetsiifiline väga selektiivne Xa faktori inhibiitor, ensüüm, mis toimib hüübimiskaskaadi põhipunktina (joonis 2). Paljude aastate jooksul esitati vere hüübimise kontseptsioon kaskaadi kujul, millel on kaks selget lähtepunkti: sisemised ja välised teed. Kuid veres hüübimisprotsessis osalevate valkude ja rakkude teadmiste areng viis raku hüübimismudeli loomisele, mis põhineb rakulise aktiivsuse ja koagulatsiooniproteiinide interaktsiooni mõistmisel ning põhjustab verehüübe moodustumist. Algfaasis aktiveerib rakumembraaniga seotud koefaktor (TF) faktor VII, muundades selle UPA faktoriks, mis viib TF-VIta kompleksi moodustumiseni. Rakumembraaniga seotud TF-ILA kompleks aktiveerib faktorid IX ja X.

Faktor Xa muundab väikese koguse protrombiini (faktor II) trombiiniks (faktor Na), mis seejärel aktiveerib faktorite V ja VIII. Paljundfaasis moodustub protrombinaasi kompleks, mis koosneb faktorist Va, fosfolipiididest, kaltsiumiioonidest ja faktorist Xa. See kompleks muudab suure hulga protrombiini trombiiniks, mida nimetatakse "trombiini plahvatuseks". Iga faktor Xa molekul toodab ligikaudu 1000 trombiini 50 molekuli.

Nagu koagulatsioonikaskaadi sisemiste / väliste radade mudelil ja koagulatsiooni rakumudelil, on faktor X aktiveerimisel Xa-ga konversioonil juhtiv roll, kuna see esineb isegi enne trombiini moodustumist. Seega ei ole Xarelto®-l otsest toimet trombiinile, see reguleerib selle moodustumist, blokeerides faktor Xa toimet ja ei blokeeri trombiini aktiivsust.

Joonis fig. 2 Vere koagulatsiooni mehhanism. TF koefaktor

Faktori Xa ainus teadaolev funktsioon on osalemine koagulatsiooni ja põletiku protsessis. Seevastu trombiin omab antikoagulante ja põletikuvastaseid omadusi, osaleb fibrinolüüsis (kaudselt aktiveerides proteiini C läbi trombiin-trombomoduliini süsteemi) lisaks oma prokoagulandile ja põletikuvastasele aktiivsusele 34. Seega võib teoreetiliselt trombiini funktsiooni rikkumine suurema tõenäosusega kui faktor Xa pärssimine põhjustada ettenägematuid pleiotroopseid toimeid peale koagulatsiooni piiride. 34

Kuna üks faktor Xa molekul põhjustab ligikaudu 1000 trombiini 50 molekuli moodustumist, annab faktori Xa inhibeerimine teoreetiliselt tõhusama võimaluse fibriini moodustumise kontrollimiseks kui trombiini inaktiveerimine. Xa faktori inhibeerimine vähendab trombiini moodustumist, mitte selle katalüütilist aktiivsust, ja seetõttu eeldatakse, et see (inhibeerimine) ei moduleeri trombiini regulatiivseid funktsioone hemostaasi, sealhulgas rakkude proliferatsiooni ja trombotsüütide aktiveerimise kontrollimisel 51.

Xarelto® inhibeerib nii vaba kui ka fiba-seotud Xa faktorit, samuti protrombinaasi kompleksi. See on erinevalt Xa faktori inhibiitori fondapariinuksist, mis pärsib Xa faktori aktiivsust, seondudes antitrombiiniga ja suurendades selle toimet, ning ei suuda protrombiini kompleksis seonduvat Xa faktorit pärssida. See, kas selline Xarelto® toime annab Xa faktori laiema pärssimise, on küsimus, mis vajab üksikasjalikumat uuringut. Xarelto® molekul on palju väiksem kui fondapariinuks-antitrombiini kompleks, mis võib omada kliinilisi eeliseid, kuna Xarelto® võib tungida trombi tõhusamalt kui fondapariinuks, mis on seotud antitrombiiniga 33.

Prognoositav farmakokineetika ja farmakodünaamika

Nagu näidatud uuringutes, milles osalesid terved vabatahtlikud ja planeeritud põlve- või puusaproteesiga patsiendid, on Xarelto prognoositav farmakokineetiline profiil. Ravim imendub kiiresti pärast suukaudset manustamistmax saavutatakse 2-4 tunni jooksul 42. Absoluutne biosaadavus on suur (80–100%) 43. Täheldati aega, mis oli proportsionaalne annusega, et saavutada plasmakontsentratsiooni muutumine muutumatul kujul keskmiselt 7... 11 tundi. Xarelto® peamised farmakokineetilised omadused on esitatud tabelis 3.

Peale selle leiti, et Xarelto ®: t

  • ei kogune ravimi korduvate annuste saamisel
  • võib kasutada olenemata toidu tarbimisest, sest mao pH ei mõjuta imendumist
  • samaaegselt manustamisel koos teiste ravimitega, kaasa arvatud naprokseen (500 mg), atsetüülsalitsüülhape (500 mg), klopidogreel (300 mg laaditav annus, millele järgneb säilitusannus 75 mg) 43
  • säilitab efektiivsuse suurte kehamassi väärtuste juures 42,52,53
  • sõltuvalt soost, vanusest ja etnilisest kuuluvusest ei ole farmakokineetikas olulist varieeruvust
  • kuvatakse kahel viisil
  • ei moodusta olulisi aktiivseid tsirkuleerivaid metaboliite 54.

Tabel 3. Xarelto® farmakokineetilised omadused

Müokardi infarkt ja uued suukaudsed antikoagulandid: kas teguri II ja faktor Xa inhibiitorid erinevad?

Piisav antitrombootiline ja antikoagulantravi takistab tromboosi teket ja vähendab seega MI riski. Uuringu tulemused näitavad, et varfariin aitab vältida südame-veresoonkonna tüsistusi patsientidel, kellel on olnud müokardiinfarkt. 2–4 Antikoagulandi kaitsev toime tuleneb asjaolust, et müokardiinfarkti patogeneesis on nii trombotsüütidel kui ka vere hüübimissüsteemil, millel varfariin toimib. 3

Uued suukaudsed antikoagulandid (PLA) kõrvaldavad palju tõkkeid, mis piiravad K-vitamiini antagonistide kasutamist, kuid ravi suukaudsete trombiini inhibiitoritega (faktor II) kaasnes MI esinemissageduse suurenemisega võrreldes varfariiniga. 5.6 Samal ajal oli teiste PLA-d saanud patsientidel MI esinemissagedus väike ja võrreldav K-vitamiini antagonistidega ravitud patsientidega 7,8 Seega põhjustasid need andmed vastuolusid selle üle, kas PLA erineb MI tekkimise riski mõjutamisest..

Artiklis käsitletakse hiljutiste uuringute tulemusi ja käsitletakse hüübimiskaskaadi blokaadi mehhanisme, mis võivad kaasa aidata müokardiinfarkti tekkimisele või, vastupidi, vähendada selle esinemise riski.

Uued antikoagulandid: erinevad sihtmärgid vere hüübimiskaskaadis

Trombiin on vere hüübimisprotsessi keskne vahendaja, mis on peamine sihtmärk trombiini suukaudsete otseste inhibiitorite nagu dabigatraan (joonis 1).

Otsesed trombiini inhibiitorid blokeerivad lahustuva fibrinogeeni muundumise fibriiniks ja takistavad ka hüübimisfaktorite aktivatsiooni, mis võib viia täiendava trombiini moodustumiseni ja stabiliseerida verehüüvet. 9

Koagulatsioonikaskaadi teine ​​keskseks komponendiks on protrombiini konversioon trombiiniks aktiveeritud faktor X toimel. Seda etappi peetakse antikoagulatsiooni atraktiivseks sihtmärgiks, arvestades selle varasemat asukohta koagulatsiooni kaskaadis kohas, kus sisemised ja välised radad lähenevad. 10,11 Teguri Xa inhibiitoritel on kõrge antikoagulantne toime, kuna selles etapis suureneb vere koagulatsioon järsult - üks faktor Xa molekul katalüüsib umbes 1000 trombiini molekuli moodustumist. Faktori Xa inhibeerimine avaldab tromboosi efektiivsele pärssimisele tugevat toimet tromboosi protsessile. 14

IM ja otsesed trombiini inhibiitorid

II faasi ja III faasi uuringutes täheldati MI suurenenud esinemissagedust trombiini otseste inhibiitorite ravis, kus võrreldi dabigatraani ja K-vitamiini antagonistide efektiivsust ja ohutust Mõnedes nendes uuringutes ei olnud akuutse koronaarse sündroomi esinemissagedus oluliselt suurem patsientidel, kes said dabigatraani. 15,16,17

Üks selline uuring oli RE-LY (antikoagulantravi randomiseeritud hindamine), milles osales rohkem kui 18 000 kodade virvendusega patsienti. 5.18

RE-LY uuringu tulemus ei viidanud müokardiinfarkti sageduse võrdlemisele dabigatraani ja varfariini ravis. Siiski oli dabigatraani grupis MI (sekundaarne lõpp-punkt) uuringute sagedus suurem kui patsientide grupis, kes võtsid varfariini INR-i poolt valitud annuses. MI aastane esinemissagedus varfariinirühmas oli 0,53%, dabigatraani grupis 0,72% annuses 110 mg kaks korda päevas (p = 0,07) ja 0,74% dabigatraani grupis 150 mg kaks korda päevas ( p = 0,048). 5

Pärast RE-LY lõpetamist viisid teadlased tagasiulatuva analüüsi, mis hõlmas täiendavaid kardiovaskulaarseid tulemusi. 15.16 Kuigi müokardiinfarkti juhtude arv oli dabigatraani grupis suurem kui K-vitamiini antagonistide ravis, kaotas rühmade erinevus statistilise tähtsuse. 15.16 Siiski jätkuvad vaidlused ja mõnede metaanalüüside tulemused viitavad müokardiinfarkti esinemissageduse suurenemisele otseste trombiini inhibiitoritega ravimisel. 6

Meta-analüüs

RE-LY uuringu vastuolulised tulemused olid aluseks metakontrollile, et võrrelda müokardiinfarkti esinemissagedust patsientidel, kes said dabigatraani või varfariini (joonis 2). 6

7 randomiseeritud kontrollitud uuringu andmete kombineerimisel rohkem kui 30 000 patsiendiga ilmnes taas, et ravi dabigatraaniga on seotud suurenenud riskiga MI või ägeda koronaarse sündroomi tekkeks võrreldes kontrolliga. MI aastane esinemissagedus oli dabigatraani grupis 1,19% ja varfariini, enoksapariini või platseebot saanud patsientidel 0,79% (p = 0,03). Risk jäi kõrgeks isegi pärast RE-LY 14 uuringu muudetud tulemuste metaanalüüsi ja lühiajaliste uuringute väljajätmist. Teise metaanalüüsi tulemused, milles hinnati MI tekkimise riski suukaudse trombiini või varfariini otsese inhibiitoriga ravimisel, kinnitasid seost trombiini otsese inhibeerimise ja MI riski vahel. Üldiselt kaaluvad dabigatraani kasutamisest saadav kasu ohtu, arvestades müokardiinfarkti madalamat esinemissagedust insultiga võrreldes.

Rivaroksabaani ravi ägedad koronaarsed tüsistused

Xa-faktori inhibeerimisega ei kaasnenud müokardiinfarkti esinemissageduse suurenemine võrreldes K-vitamiini antagonistide raviga Kliinilistes uuringutes paljude patsientidega, sealhulgas kodade virvendus (joonis 3) ja suur venoosse trombemboolia tüsistuste risk, ravi Xarelto'ga (rivaroksabaan). ei suurendanud müokardiinfarkti tekkimise riski võrreldes K-vitamiini antagonistidega

Tuletame meelde ka seda, et Xarelto (rivaroksabaan) on ainus PLA, millel on registreeritud akuutse koronaarsündroomi (ACS) järgselt patsientidel südame-veresoonkonna põhjustatud surmade ja müokardiinfarkti ennetamise näidustused, mis esinesid koos kardiovaskulaarsete biomarkerite kasutamisega atsetüülsalitsüülhappega kombineeritud ravis. ) või ASA ja tienopüridiiniga (klopidogreel või tiklopidiin).

Võimalik põhjus?

Jääb ebaselgeks, miks II faktori inhibeerimine oli seotud müokardiinfarkti esinemissageduse suhtelise suurenemisega võrreldes varfariiniga. See toime võib olla tingitud trombiini moodustumise otsesest pärssimisest, kuna see puudus Xa faktori inhibiitoritega ravimisel. 8 Esialgses väljaandes 5 viitasid RE-LY teadlased sellele, et dabigatraanil ei ole kaitsetegevust koronaarsete isheemiliste tüsistuste vastu, mida varem näidati varfariinravi ajal. 3 Metaanalüüsi autorite sõnul on täheldatud toime iseloomulik trombiini otsesele inhibiitorile, kuna Xa faktori inhibiitorite ravimisel ei saadud sarnaseid andmeid. 6.8 Autorid väitsid, et trombiini otsesel inhibiitoril on soovimatud omadused, mis võivad mõjutada ateroskleroosi või aterosklerootilise veresoonkonna haigusega seotud tulemuste arengut. 6

Kirjandus

1. Kumar P, Clark M. kliiniline meditsiin. 6 edn. London: Elsevier Ltd.
2. Antikoagulandid koronaartromboosi (ASPECT) uuringute rühmas. Pikaajalise suukaudse antikoagulantravi mõju suremusele ja kardiovaskulaarsele haigestumusele pärast müokardiinfarkti. Lancet 1994; 343: 499-503.
3. Hurlen M, Abdelnoor M, Smith P, Erikssen J, Arnesen H. Warfarin, aspiriin või mõlemad pärast müokardiinfarkti. N. Engl. J. Med., 2002, 347: 969-974.
4. Rothberg MB, Celestin C, Fiore LD, Lawler E, Cook JR. Varfariin ja aspiriin pärast müokardiinfarkti või akuutset koronaarsündroomi: metaanalüüs riskiga ja kasuga. Arch Intern Med 2005, 143: 241-250.
5. Connolly SJ, Ezekowitz MD, Yusuf S, Eikelboom J, Oldgren J, Parekh A et al. Kodade virvenduse korral on dabigatraan vs varfariin. N. Engl. J. Med., 2009, 361: 1139-1151.
6. Uchino K, Hernandez AV. Rasked koronaarsed sündmused: mitte-madalamate juhuslike kontrollitud uuringute metaanalüüs. Arch Intern Med 2012, 172: 397-402.
7. Mega JL, Braunwald E, Wiviott SD, Bassand JP, Bhatt DL, Bode C et al. Rivaroksabaan hiljuti ägeda koronaarse sündroomiga patsientidel. N. Engl. J. Med., 2012, 366: 9–19.
8. Patel MR, Mahaffey KW, Garg J, Pan G, Singer DE, Hacke W et al. Rivaroksabaan võrreldes varfariiniga mittevalgulaarse kodade virvenduse korral. N. Engl. J. Med., 2011, 365: 883-891.
9. Di Nisio M, Middledorp S, Büller HR. Otsesed trombiini inhibiitorid. N Engl. J. Med., 2005, 353: 1028-1040.
10. Alexander JH, Singh KP. Faktori Xa inhibeerimine: potentsiaalne sihtmärk uute antikoagulantide väljatöötamiseks. Am J Cardiovasc Drugs 2005; 5: 279-290.
11. Kubitza D, Haas S. Uued faktor Xa inhibiitorid trombembooliliste haiguste jaoks. Expert Opinion Investig Drugs 2006; 15: 843–855.
12. Haas S. Uued suukaudsed Xa ja IIa inhibiitorid: uuendused kliiniliste uuringute tulemuste kohta. J Thromb Haemost 2008; 25: 52-60.
13. Mann KG, Brummel K, Butenas S. Milleks see on trombiin? J Thromb Haemost 2003; 1: 1504-1514.
14. Turpie AG. Suukaudsed, otsesed Xa-faktori inhibiitorid trombembooliliste haiguste tõrjeks. Arterioscl Thromb Vasc Biol 2007; 27: 1238-1247.
15. Connolly SJ, Ezekowitz MD, Yusuf S, Reilly PA, Wallentin L. Pikaajaliste antikoagulantravi uurijate randomiseeritud hindamine. RE-LY kohtuprotsessis hiljuti tuvastatud sündmused. N Engl J Med 2010; 363: 1875-1876.
16. Hohnloser SH, Oldgren J, Yang S, Wallentin L, Ezekowitz M, Reilly P et al. Müokardi isheemilised sündmused atriaalse fibrillatsiooniga patsientidel, keda raviti dabigatraaniga või varfariiniga RE-LY uuringus. Ringlus 2012, 125: 669–676.
17. Schulman S, Kearon C, Kakkar AK, Schellong S, Eriksson H, Baanstra D et al. Dabigatraani, varfariini või platseebo laiendatud kasutamine venoosse trombemboolia korral. N Engl. J. Med., 2013, 368: 709-18.
18. Tran A, Cheng-Lai A. Dabigatraaneteksilaat. Esimene suukaudne antikoagulant on Ameerika Ühendriikides saadaval pärast varfariini manustamist. Cardiol Rev 2011, 19: 154–161.
19. Artang R, Rooma E, Nielsen JD, Vidaillet HJ. See oli trombiini inhibeeriv. Am J Cardiol 2013, 112: 1973-1979.
20. Skanes AC, Healey JS, Cairns JA, Dorian P, Gillis AM, McMurtry MS jt. 2012. aasta uuendus: Kanada südame-veresoonkonna ühiskonna atriaalse fibrillatsiooni juhised rütmi juhtimiseks. Can J Cardiol 2012; 28: 125–136.

Antikoagulant

Antikoagulandid (antitrombiini preparaadid) on ravimite klass, mis toimib vere hüübimise (koagulatsiooni) vältimiseks. Selliseid aineid toodetakse loomulikult kaevandustes ja vere imemiseks putukates. Rühma farmatseutilisi preparaate, mida nimetatakse antikoagulantideks, võib kasutada inimese süstimiseks trombootiliste haiguste ravimina. Mõningaid antikoagulante kasutatakse meditsiiniseadmetes, nagu katseklaasid, vereülekande konteinerid ja hemodialüüsi seadmed.

Rakendus

Antikoagulandid vähendavad vere hüübimist, mis võib takistada süvaveenide tromboosi, kopsuembooliat, müokardiinfarkti ja isheemilist insulti. Antikoagulantide terapeutiline kasutamine hõlmab kodade virvendust, kopsuembooliat, süvaveenide tromboosi, veenitromboembooliat, kongestiivset südamepuudulikkust, insulti, müokardiinfarkti ja geneetilist või omandatud hüperkoagulatsiooni. Otsus terapeutilise antikoagulatsiooni algatamiseks hõlmab sageli vahendite kasutamist, et hinnata mitmete verejooksude eeldatavaid ohte, arstid kasutavad verejooksu võimalikkust koos antikoagulantidega mitteinvasiivse eel stratifitseerimise abil. Nende vahendite hulgas on verejooksuriski hindamise skaala, 1) ATRIA ja skaala, et hinnata kodade fibrillatsiooniga patsientide trombembooliliste tüsistuste riski.

Kõrvaltoimed

80-aastased ja vanemad patsiendid võivad olla eriti altid hemorraagilistele tüsistustele, mille intensiivsus on 13 verejooksu 100 inimese kohta. Neid suukaudseid antikoagulante kasutatakse laialdaselt mürgisena põllumajanduslike kahjurite, eriti näriliste puhul. (Täpsemat teavet vt rodentitsiididest ja varfariinist). K-vitamiini jagamine coumadiinraviga suurendab arterite ja südameklapi loksumise ohtu, eriti kui D-vitamiini tase on liiga kõrge.

Koostoimed

Toiduaineid ja toidulisandeid antikoagulantidega on nattokinaas, lumbrokinaas, õlu, mustikad, seller, jõhvikad, kalaõli, küüslauk, ingver, ginkgo biloba, ženšenn, roheline tee, hobukastan, lagrits, niatsiin, sibul, papaia, granaatõun, punane ristik, sojaoad, naistepuna, kollajuur, nisu rohi ja paju koor. 3) Paljudel taimsetel toidulisanditel on antikoagulandid, nagu näiteks punane salvei ja feverfew. Antikoagulante saavatel patsientidel on lubatud kasutada multivitamiine, mis ei mõjuta vere hüübimist. Kuid mõned toiduained ja toidulisandid aitavad kaasa koagulatsioonile. Nende hulka kuuluvad lutsern, avokaado, kassi küünis, koensüüm Q10 ja tumedad lehtköögiviljad nagu spinat. Antikoagulantide kasutamise ajal tuleks nende kasutamist vältida või, kui kontrollitakse vere hüübimist, tuleb nende kasutamist hoida ligikaudu konstantsel tasemel, nii et antikoagulantide annust saaks säilitada piisaval tasemel, et see toime ei muutuks ilma vere hüübimist muutmata. Greipfruud interakteerub mõnede antikoagulantidega, mis suurendab kehast eemaldamise aega, mistõttu tuleb seda kasutada antikoagulantidega ravimisel ettevaatlikult. Antikoagulante kasutatakse sageli ägeda süvaveenide tromboosi raviks. Inimesed, kes võtavad selle haiguse raviks antikoagulante, peaksid vältima täiendavat ravi, sest kliiniline efektiivsus sõltub pidevast kõndimisest ja liikuvusest sellisel viisil antikoagulantide kasutamisel. Voodipesu antikoagulantide võtmise ajal võib patsiendile kahju tekitada, kui ta ei ole meditsiiniliselt vajalik. 4)

Füüsikalised ja keemilised omadused

Uuemad suukaudsed antikoagulandid (NOAC), kaasa arvatud dabigatraan, rivaroksabaan ja apiksabaan, on sama efektiivsed või paremad kui kumariinid (K-vitamiini antagonistid), millel on vähem tõsiseid kõrvaltoimeid [8]. Uusimad antikoagulandid (NOAC) on kallimad kui traditsioonilised antikoagulandid, ja neeruprobleemidega patsiendid peavad neid võtma ettevaatusega. Lisaks ei ole neil vastumeetmeid, mistõttu on äärmiselt hädavajalikel juhtudel (õnnetusjuhtum, hädaolukorras tegutsemine) raske oma keha toime peatada. Optimaalse toimimise jaoks on ülimalt oluline, et selle raviga seotud juhised oleksid täpsed.

Kumariinid (K-vitamiini antagonistid)

Need suukaudsed antikoagulandid on saadud kumariinist, mida leidub paljudes taimedes. Selle klassi peamine esindaja on varfariin (Coumadin). Antikoagulantide toime saavutamiseks kulub vähemalt 48 kuni 72 tundi. Kui on vaja kohest tegutsemist, võib samaaegselt võtta hepariini. Neid antikoagulante kasutatakse süvaveenide tromboosi (DVT), kopsuemboolia (PE) raviks ja kodade virvenduse (AF), samuti mehaaniliste kunstlike südameklappide embolia vältimiseks. Teiste näidete hulka kuuluvad atsenokumarool ja fenprokumoon, atromentiin ja fenündioon. Brentifakumi ja difenakumi kumariini kasutatakse näriliste tõrjevahendina, kuid neid ei kasutata meditsiinilistel eesmärkidel.

Hepariin ja derivaadid

Hepariin on bioloogiline aine, mis on tavaliselt saadud sigade soolest. See toimib aktiveerides antitrombiini III, mis takistab vere hüübimist trombiiniga. Hepariini võib kasutada nii in vivo (süstimise teel) kui ka laboritingimustes, et vältida vere hüübimist ja meditsiiniseadmeid. Veenipunktuuris on hepariini sisaldavatel verejooksutorudel vereproovide jaoks tavaliselt roheline kork.

Madala molekulmassiga hepariin

Madala molekulmassiga hepariin, kõige laialdasemalt kasutatav toode, on efektiivne, sest see ei nõua aPTT koagulatsiooni indeksi jälgimist (on prognoositavam plasmatasemega) ja tal on vähem kõrvaltoimeid.

Xa faktori sünteetilised pentasahhariidi inhibiitorid

Faktori Xa otsesed inhibiitorid

Ravimid nagu rivaroksabaan, apiksabaan ja edoksabaan inhibeerivad Xa faktorit otseselt (erinevalt hepariinidest ja fondapariinuksist, mis toimivad antitrombiini aktiveerimisel). Siia kuuluvad ka betriksaban (LY517717), mille on valmistanud Portola Pharmaceuticals, dareksaban (YM150), mida toodab Astellas, ning uuem TAK-442 letaxaban (Takeda) ja airbaxaban (PD0348292) (Pfizer). Darexabani areng katkestati 2011. aasta septembris: uuringus müokardiinfarkti kordumise ennetamise kohta kahekordse trombotsüütide vastase ravi lõpus ei näidanud ravim efektiivsust ja verejooksu oht suurenes umbes 300%. Uuringu II faasi negatiivsete tulemuste tõttu katkestati letaxabaani ägeda koronaarse sündroomi tekkimine 2011. aasta mais. 5)

Otsesed trombiini inhibiitorid

Teist tüüpi antikoagulante esindavad otsesed trombiini inhibiitorid. Selle klassi praegused liikmed hõlmavad kahevalentseid ravimeid hirudiini, lepirudiini ja bivalirudiini; monovalentsete ravimite hulka kuuluvad argatroban ja dabigatraan. Otsene suukaudne trombiini inhibiitor ximelagatran (“Exanta”) ei olnud USA toidu- ja ravimiameti (FDA) poolt heaks kiidetud 2004. aasta septembris ning see eemaldati täielikult turult 2006. aasta veebruaris pärast teatamist raskest maksakahjustusest ja südamest krambid. 2010. aasta novembris kiitis FDA heaks dabigatraani kodade virvenduse raviks.

Antitrombiini valgu terapeutilised ained

Valgu terapeutilise toimeainena kasutatav antitrombiini valk võib olla eraldatud inimese plasmast või toodetud kunstlikult (näiteks geneetiliselt muundatud kitsede piimast saadud atriin 6)). FDA kinnitab antitrombiini antikoagulandina, et vältida verehüüvete teket enne operatsiooni või sünnituse ajal või pärast sünnitust kaasasündinud antitrombiini puudulikkusega patsientidel.

Muud tüüpi antikoagulandid

Teadus- ja arendustegevuseks, diagnoosimiseks või ravimikandidaatideks on palju antikoagulante.

Ühiskond ja kultuur

Varfariin (Coumadin) on peamine agent, mida kasutatakse Ameerika Ühendriikides ja Ühendkuningriigis. Akenokumarooli ja fenprokumooni kasutatakse sagedamini väljaspool Ameerika Ühendriike ja Ühendkuningriiki.

Laboratoorne kasutamine

Laboratoorsed vahendid, vereülekande konteinerid, samuti meditsiini- ja kirurgiaseadmed ummistuvad ja muutuvad kasutamiskõlbmatuks, kui veri on võimeline hüübima. Lisaks lisatakse laboratoorsetes vereanalüüsides kasutatavatele katseklaasidele kemikaale, mis takistavad vere hüübimist. Lisaks hepariinile toimivad enamik neist kemikaalidest kaltsiumiioonide sidumisest, takistades nende kasutamist koagulantvalgudena.

Antikoagulandid: ravimite toimemehhanism, näidustused ja vastunäidustused

Statistika kohaselt on Venemaal suremuse struktuuris üks juhtivaid kohti mitmesugustes trombemboolilistes tüsistustes (kopsuemboolia, süvaveenitromboos). Meditsiinis kasutatakse selliste seisundite raviks antikoagulante - aineid, mis takistavad fibriini õhukeste kiudude teket koagulatsioonitegurite mõjul, pärsivad juba moodustunud verehüübe kasvu ja suurendavad sisemise fibrinolüütilise (verehüübe resorptsiooni) ensüümide aktiivsust.

Praegu põhineb antikoagulantide klassifikatsioon nende toime kehas kasutamisel. On ravimeid:

  • Otsene toimimine (nt hepariin). Toimige kiiresti, nende toime on seotud otsese mõjuga vere hüübimissüsteemile erinevate koagulatsioonifaktorite ja kolme koagulatsioonifaasi inhibeerimise komplekside moodustumise kaudu.
  • Kaudne tegevus (K-vitamiini antagonistid). Nad tegutsevad pikka aega, kuid pärast latentset („vaigistavat”) perioodi lõpetavad nad K-vitamiini konversiooniga seotud ensüümi aktiveerumise, peatades seeläbi vitamiinist sõltuvate plasma koagulatsioonifaktorite (II, VII, IX, X) tootmise.

Frakteerimata hepariin (UFH) on koduloomade elunditest saadud looduslik aine. Selle toimemehhanism põhineb võimel seonduda antitrombiiniga ja seeläbi suurendada selle võimet deaktiveerida hüübimisfaktorid IIa, IXa, Xa, XIa, XIIa. Trombiin (faktor IIa) on eriti tundlik hepariin-antitrombiini kompleksi toime suhtes.

Hepariini toime viiakse läbi ainult parenteraalselt manustatuna: pärast intravenoosset manustamist ilmneb aktiivsus kohe pärast subkutaanset manustamist 20–60 minuti pärast, kui biosaadavus on 10–40% (st ainult see protsent ainest jõuab süsteemse vereringeni). Kuna fraktsioneerimata hepariin seondub plasmavalkudega, on sellel ravimil sageli ettearvamatu antikoagulantne toime. Hepariini vajaliku terapeutilise kontsentratsiooni loomiseks ja säilitamiseks veres vajab pidevat intravenoosset manustamist või regulaarset subkutaanset süstimist, võttes arvesse biosaadavust. Ravi ohjamiseks on vaja määrata aktiveeritud osaline tromboplastiini aeg (APTT), mille indikaatorid peaksid jääma kontrollväärtuse vahemikku 1,5-2,3.

Madala molekulmassiga hepariinid (LMWH) - keemiliselt või ensümaatiliselt töödeldud fraktsioneerimata hepariin. Toimemehhanism on sarnane UFG-ga, kuid LMWH on oluliselt aktiivsem hüübimisfaktori Xa suhtes kui trombiin. Intravenoosse manustamise korral ilmneb maksimaalne aktiivsus subkutaanse manustamise järel 5 minuti pärast - 3-4 tunni pärast, kui biosaadavus on üle 90%, mistõttu plasma antikoagulandi aktiivsuse stabiilse taseme säilitamiseks ei ole erinevalt UFH-st vajalik pidev intravenoosne infusioon. Ravimi doseerimine viiakse läbi individuaalselt Xa-vastase veresuhkru kontrolli all.

Naatrium Fondapariinuks on ravim, mis desaktiveerib Xa hüübimisfaktori selektiivselt. Aine biosaadavus pärast subkutaanset manustamist on 100% ja aktiivsus säilib 17-21 tundi, seega on terapeutilise kontsentratsiooni saavutamiseks piisav ühekordne subkutaanne süstimine.

Bivalirudiin on aine, mis pärsib otseselt trombiini, ainsa sarnase toimega ravimit, mis on registreeritud parenteraalseks manustamiseks Venemaal. Selle toime on suunatud mitte ainult veres ringleva trombiini, vaid ka moodustunud trombi sees oleva trombiini suhtes. Ravimit manustatakse ainult intravenoosselt ja selle toime aeg on vaid 25 minutit. Ettenähtud annused on fikseeritud ja ei vaja vere hüübimisparameetrite jälgimist.

Faktori ha inhibiitorid

Kirjeldatakse mitteloodusliku ühendiga ühendit, mis inhibeerib spetsiifiliselt Xa faktori aktiivsust, üldvalemiga (I) A1-A2- (A3).m-B, kus m = 0 või 1; A1 - R1-R2-R3; A3 - R7-R8-R9; R1 valitud rühmast, kuhu kuuluvad R '1-Xr1"kus X on N ja R"1 ja R "1 sõltumatult valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, alküül-, atsüül-, arüül-, arüülalküül- ja amino-kaitserühmad; R2 - -CR99R100, kus r99 ja R100 on sõltumatult valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, alküül, arüülalküül, heteroarüülalküül ja heteroarüül; R3 - -C (O) - või -CH2-; R4 - -NR50-, kus r50 - H; R5 - -CR201R202, kus r201 ja R202 on sõltumatult valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, alküül, arüül ja arüülalküül; R6 - -C (O) või -CH2-; R7 - -NR51, kus r51 - H; R8 - -CR210R211-, kus r210 ja R211 on sõltumatult valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, alküül, arüülalküül ja heterotsükkel ning alküül, alküülarüül ja heterotsükkel võivad olla asendatud Q või - (CH2)n-Q, kus n = 1-5 ja Q on valitud rühmast, kuhu kuuluvad amiin-, amidiin-, imidasool- ja guanidiinrühmad, mis võivad olla asendatud, ning mono-, di-, tri- või tetraalküülammoonium farmatseutiliselt vastuvõetavad soolad, selle isoureid või isotioureid; R9 - -C (O) - või -CH2-; B - -NHR52, kus r52 on valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, alküül, arüülalküül, heteroarüülalküül, heteroarüül, üks või kaks aminohapet või nende farmatseutiliselt vastuvõetav sool, amiid, ester, alkohol või aldehüüd. Ühend valemiga (I) takistab verehüüvete moodustumist, mis on spetsiifiline faktor Xa madala molekulmassiga inhibiitor, on efektiivne, kuid ei põhjusta ebasoovitavaid kõrvaltoimeid. 8 s. ja 20 hj F-ly, 5 tab., 4 Il.

Üldiselt käsitleb leiutis verehüüvete vere valkude inhibeerimist ja eriti vere hüübimissüsteemi faktor Xa spetsiifilisi inhibiitoreid.

Elulemuse seisukohalt on oluline verehüüvete moodustamine. Mõnedes haigustes on vereringe moodustumine vereringesüsteemis iseenesest haigestumuse allikas. Seega on mõnikord soovitav takistada verehüüvete moodustumist. Siiski on vere hüübimissüsteemi täielik inhibeerimine ebasoovitav, sest järgneb eluohtlik verejooks.

Verehüüvete intravaskulaarse moodustumise vähendamiseks on eksperdid välja töötanud protrombinaasi või faktori Xa efektiivse inhibiitori, mis sisestatakse protrombinaasi kompleksi, kus see aktiveerib trombiini trombide moodustumise ajal.

Xa faktori inhibiitori sobivad kontsentratsioonid suurendavad trombide moodustumise alustamiseks vajalike protrombinaasi moodustavate ainete taset, kuid ei põhjusta vere hüübimise tarbetut pikenemist niipea, kui on saavutatud trombiini läviväärtus. Vaatamata sellise inhibiitori loomise soovitavuse pikaajalisele tunnustamisele ei ole kliinilises praktikas praegu efektiivset spetsiifilist Xa faktori inhibiitorit.

Paljudes kliinilistes piirkondades on vaja antikoagulantravi.

Praegu saadaval olevad ravimid paljudes kliinilistes valdkondades on ebarahuldavad. Näiteks peaaegu 50% patsientidest, kes on läbinud täieliku puusaliigese asenduse, tekivad sügav koronaartromboos (GWT).

Heakskiidetud teraapias kasutatakse väikese molekulmassiga hepariini (LMWH) fikseeritud annust ja hepariini varieeruvat annust. Isegi selliste ravirežiimide puhul areneb 10–20% patsientidest GWT ja 5–10% verejooksu tüsistustest.

Teine kliiniline olukord, kus on vaja tõhusamaid antikoagulante, on plastiline kirurgia südamepuudulikkuse veresoontes, millel on suurenenud müokardiinfarkti või stenokardia oht.

Kaasaegne tavapärane ravi, mis hõlmab hepariini ja aspiriini kasutamist, on seotud 6-8% vaskulaarse oklusiooni juhtumitega 24-tunnise protseduuri ajal. Hepariini kasutamisest tingitud vereülekandeid nõudvate verejooksu komplikatsioonide määr on samuti umbes 7%.

Pealegi, kuigi üsna suur hulk juhtumeid ilma anumate ummistumiseta, on hepariini kasutamine pärast protseduuri lõppu ebaefektiivne ja võib olla ebasoodne.

Kõige levinumad vere hüübimise inhibiitorid on hepariin ja sellega seotud sulfaatsed polüsahhariidid, LMWH ja hepariinsulfaat. Nende ühendite molekulidel on antikoagulandid, soodustades koagulatsiooniprotsessi loomuliku regulaatori, trombiini III ja trombiini ja Xa faktoriga seondumist. Hepariini inhibeeriv toime on algselt suunatud trombiini vastu, mis on inaktiveeritud umbes 100 korda kiiremini kui faktor Xa. Kuigi hepariiniga võrreldes on hepariinsulfaat ja LMWH Xa efektiivsemad inhibiitorid kui trombiini puhul, on erinevus in vitro väike (3-30 korda) ja toime in vivo võib olla varieeruv. Hirudiin ja hirulog on samuti trombiini suhtes spetsiifilised antikoagulandid, mida kasutatakse tänapäeval. Need trombiini inhibeerivad antikoagulandid võivad samuti põhjustada verejooksu.

Prekliinilised uuringud paavianide ja koertega on näidanud, et spetsiifilised faktori Xa inhibiitorid takistavad trombide teket, ilma et see põhjustaks tagatist veritsust, mida täheldatakse trombiini otseste inhibiitorite kasutamisel. Sellisteks faktor Xa inhibiitoriteks on näiteks 2,7-bis- (4-amidinobensülideen) tsükloheptanoon ja Na-tosüülglütsüül-3-amidinofenüülalaniini metüülester ("TENSTOP"), mille efektiivsed inhibeerivad kontsentratsioonid (Ki) on vastavalt 20 nm ja 800 nm ( +) - (2S) -2- (4 ( <(3S)-1-ацетимидоил-3-пирролидинил>oksü) fenüül) -3- (7-amidino-2-naftüül) propaanhape on ka faktor Xa inhibiitorite klassi liige (Katakura et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 197: 965-972 (1993)). Kuid neid ühendeid ei kasutata kliinilises praktikas.

Samuti on avastatud faktor Xa spetsiifilisi valgu inhibiitoreid ja nende hulka kuuluvad näiteks antistasiin (ATC) ja puugist (CAP) eraldatud antikoagulantne peptiid. ATC, mis on eraldatud leech Haementerin officinalis'est, sisaldab 119 aminohapet ja on Ki teguri Xa puhul võrdub 0,05 nm. Eri Ornithodoros moubata-st eraldatud CAP sisaldab 60 aminohapet, selle jaoks on faktori Xa Ki väärtus ligikaudu 0,5 nm.

Saadud rekombinantse ATS-i ja CAP-i efektiivsust uuriti mitmetel loomadel. Mõlemad inhibiitorid vähendavad verejooksuaega võrreldes teiste antikoagulantidega ja takistavad vere hüübimist, kui testitakse tromboplastiini poolt põhjustatud koronaartromboosi mudelil ligeeritud jugulaarsetes veenides.

Selle mudeli tulemused on korrelatsioonis praegu populaarse ravimi, hepariini abil saadud tulemustega.

Samuti leiti, et ATC subkutaanne manustamine on efektiivne tromboplastiini poolt põhjustatud hajutatud intravaskulaarse koagulatsiooni (RVC) mudelil testimisel. CAP ennetab tõhusalt arteriaalse tromboosi ja "vähendatud verevoolu", mis on põhjustatud polüestri ("DACRON") implantaadi kirurgilisest sisseviimisest, doosides, mis annavad aktiveeritud osalise tromboplastiini aja (aHTP) kliiniliselt vastuvõetava pikenemise, st. vähem kui kaks korda. Võrdluseks ei takista standardne hepariin, isegi kui annused, mis põhjustavad acHTP viiekordistumist, takistada tromboosi ja vähenenud verevoolu implantaadi sees. ATPP on kliinilise koagulatsiooni test, mis on eriti tundlik trombiini inhibiitorite suhtes.

ATS ja KAP polnud kliinikus kasutust leidnud. Nende kahe inhibiitori üheks oluliseks puuduseks on see, et vajalike korduvate annuste manustamine põhjustab neutraliseerivate antikehade moodustumist, piirates seeläbi nende kliinilist kasutamist.

Pealegi muudab CAPi ja ATSi suurus suukaudse manustamise võimatuks, piirates nende patsientide arvu, kes saavad neist ainetest kasu.

Faktori Xa spetsiifiline inhibiitor on praktiliselt oluline meditsiinis. Konkreetselt on faktori Xa inhibiitor efektiivne olukordades, kus kasutatavad hepariini ja sulfaasi sisaldavad polüsahhariidid on ebaefektiivsed või halvasti efektiivsed. Seega on vaja luua spetsiifiline faktor Xa madala molekulmassiga inhibiitor, mis takistab verehüüvete teket, mis on efektiivne, kuid ei põhjusta soovimatuid kõrvaltoimeid.

See leiutis rahuldab selle vajaduse ja annab soovitud eelised.

Leiutis käsitleb ühendeid, mis inhibeerivad spetsiifiliselt faktor Xa aktiivsust.

Leiutise ühendil on struktuur X1-Y-I-R-X2, kus on x1 Termin "vesinik" tähendab vesinikku (H), atsüüli, alküüli või arüülalküüli või ühte või enamat aminohapet ja X2 "Modifitseeritud C-terminaalne järjestus", üks või mitu rühma, mis kaitsevad karboksürühma (vt allpool), üks või mitu aminohapet või muud asendajat ja Y, I ja R vastavad vastavalt aminohapetele - türosiinile, isoleutsiinile ja arginiinile ning peptiidmimeetikale või orgaanilised struktuurid, millel on vastavalt sama funktsionaalne aktiivsus kui türosiinil, isoleutsiinil ja arginiinil. Lisaks on leiutisekohasel ühendil struktuur A1-A2- (A3)m-B, nagu on kirjeldatud käesolevas kirjelduses.

Leiutisekohane ühend võib olla lineaarne või tsükliline, sisaldades umbes 2 kuni umbes 43 jääki molekuli pikkuses ja modifitseeritud N-sisaldavate ja / või C-sisaldavate terminali järjestustega. Sellistel ühenditel on spetsiifiline faktor Xa aktiivsuse inhibeerimine Ki-C-ga3H7N) -Leu-Ala-NH2; Ac-Tyr-Ile-PalMe (3) -NH2; Tyr-Ile-Arg-NH2; (D) -Tir-Ile-Arg-Leu-Pro-NH2; Ac- (Bzl) Gly- (CHx) Gly- (3-guanidopropüül) Cly-NH2; Tsüklo (Gly-Tyr-Ile-Arg-Gly); Tfa- (iBu) Tyr-Chg-Arg-Leu-Pro-NH2; Ac-pAph-Chg-Arg-Leu-Pro-NH2; Ac-Nal (2) -Chg-Arg-Leu-Pro-NH2; Ac-pAph-Chg-Palme (3) -NH2; ja nende farmatseutiliselt vastuvõetavad soolad ja derivaadid, mis sisaldavad terminaalset C-rühma, näiteks amiidid, estrid, alkoholid ja aldehüüdid (vt ka tabel 5).

Leiutis pakub meetodeid Xa faktori aktiivsuse spetsiifiliseks inhibeerimiseks ja hüübimise inhibeerimiseks indiviidil. Samuti on esitatud meetodid faktor Xa või aktiivsuse taseme määramiseks.

Joonis fig. 1 on vere hüübimiskaskaadi skemaatiline diagramm.

Joonis fig. 2 kujutab leiutise ühendi struktuuri näidet.

Joonis fig. 3A, B näitavad leiutisekohaste ühendite valmistamise reaktsiooniskeeme.

Vere hüübimine on kompleksne protsess, mis hõlmab järjestikku paljunevat ensüümi aktivatsioonireaktsiooni, milles plasma zümogeenid aktiveeritakse järjestikku piiratud proteolüüsi teel. Mehaaniliselt jagatakse kaskaadi vereringe sisemisteks ja välisteks tsükliteks, mis koonduvad, kui faktor Xa on aktiveeritud; järgnev trombiini moodustumine voolab läbi ühe ühise tsükli (vt joonis 1).

Käesolev uuring viitab sellele, et sisemine tsükkel mängib olulist rolli fibriini moodustumise säilitamisel ja kasvatamisel, samas kui välissükkel on kriitilise tähtsusega vere hüübimise alustamise faasis. Üldiselt aktsepteeritakse, et vere koagulatsioon algab füüsiliselt pärast kompleksse koefaktori / faktor VIIa moodustumist. Kohe pärast moodustumist käivitab see kompleks kiiresti koagulatsiooni IX ja X faktorite aktiveerimise teel. Hiljuti moodustunud faktor Xa moodustab seejärel 1: 1 kompleksi koos faktoriga Va ja fosfolipiididega, moodustades protrombinaasi kompleksi, mis vastutab lahustuva fibrinogeeni muutmise eest lahustumatuks fibriiniks. Aja möödumisel inhibeerib VII faktori / koefaktori kompleksi (välise tsükli) aktiivsust Kunitz-tüüpi proteaasi inhibiitorvalk, TFPI, mis, kui ta moodustab kompleksi Xa-teguriga, võib otseselt pärssida faktor Vlla / koefaktori kompleksi proteolüütilist aktiivsust.

Koagulatsiooniprotsessi toetamiseks inhibeeritud välise süsteemi juuresolekul tekitatakse täiendavalt faktor Xa trombiini vahendatud sisemise tsükli aktiivsuse tõttu. Seega mängib trombiin topelt autokatalüütilist rolli, viies läbi oma tootmise ja fibrinogeeni muundumise fibriiniks.

Trombiini moodustumise autokatalüütiline olemus on oluline takistus reguleerimata verejooksu vastu ja tagab, et selle protrombinaasi künnisväärtuse saavutamisel tekib vere hüübimine lõpuni, mis viib näiteks verejooksu lõpuni.

Seega on kõige soovitav luua agenseid, mis inhibeerivad koagulatsiooni ilma trombiini otse inhibeerimata.

Käesolev leiutis pakub YIR-peptiide, mis on ühendid, mis inhibeerivad faktor Xa aktiivsust, ja praktiliselt ei inhibeeri teiste vere hüübimisprotsessis osalevate proteaaside aktiivsust.

Termin "ühend" või "YIR peptiid" tähendab siin kasutatuna ebaloomulikku Tyr-Ile-Arg (YIR) peptiidi ja selle analooge ja mimeetikume, mis võivad inhibeerida faktor Xa aktiivsust.

YIR-järjestust nimetatakse siin "YIR-fragmendiks" ja see koosneb türosiin-isoleutsiin-arginiin-tripeptiidist või selle funktsionaalsest ekvivalentist, näiteks pAph-Chg-PalMe (3), pAph-Chg-PalMe (3) -NH2 ja pAph-Chg-AMP (4) (vt lühendeid tabelis 1).

Sellised leiutisekohased ühendid sisaldavad vähemalt ühte YIR fragmenti või selle funktsionaalset ekvivalenti ja on võimelised spetsiifiliselt inhibeerima faktor Xa aktiivsust. Mugavuse huvides kasutatakse terminit "ühend" ja "YIR peptiid" laialdaselt, et viidata leiutise peptiididele, kaasa arvatud funktsionaalsed ekvivalendid nagu peptiidanaloogid, mimeetilised peptiidid ja sünteetilised orgaanilised ühendid. Leiutisekohase YIR-peptiidi funktsionaalset ekvivalenti võib iseloomustada osaliselt selles kirjelduses kirjeldatud struktuuriga ja faktori Xa aktiivsuse inhibeerimiseks Ki väärtusega 100 µM (vt näide XXXVII).

Leiutisekohase YIR peptiidi peptiidanaloogid hõlmavad näiteks mittelooduslikke aminohappeid või keemiliselt modifitseeritud aminohappeid sisaldavaid peptiide, eeldusel, et ühend säilitab faktor Xa inhibeeriva toime (näiteks vt tabelit 2). Samamoodi esindavad mimeetilised peptiidid mitte-aminohappe keemilisi struktuure, mis matkivad leiutise YIR peptiidi struktuuri ja säilitavad inhibeeriva toime faktor Xa vastu. Selliseid mimeetikume iseloomustatakse üldiselt sarnaste füüsikaliste omadustega, nagu suurus, laeng või hüdrofoobsus, mis on esitatud sobivas ruumilises orientatsioonis, nagu on leitud tavapärase YIR peptiidi vastasioonis. Mimeetilise peptiidi spetsiifiline näide on ühend, milles ühe või mitme aminohappe vaheline amiidsideme on asendatud näiteks süsinik-süsiniksideme või muu sidemega, nagu on tehnika tasemest hästi teada (vt näiteks Sawyer peptiidipõhise ravimi disainis, lk 387- 422 (ACS, Washington DC 1995), seega pakub leiutis ühendeid, mis inhibeerivad faktorit Xa, millel on struktuur A1-A2- (A3)m-B, kus m = 0 või 1, mida on kirjeldatud allpool. Selliste peptiidide näited, mis võivad olla mimeetilised, on toodud käesolevas kirjelduses.

Terminit "aminohape" kasutatakse kõige laiemas tähenduses viitena 20 looduslikult esinevale aminohappele, mis on transleeritud geneetilisest koodist ja mis koosnevad valkude plokkidest, kaasa arvatud, kui ei ole teisiti määratletud, L-aminohapped ja D-aminohapped, samuti keemiliselt modifitseeritud aminohapped, nagu aminohape analoogid, looduslikult esinevad aminohapped, mida tavaliselt ei sisestata valkudesse, näiteks norleutsiini ja keemilisi sünteetilisi ühendeid, millel on aminohapetele iseloomulikud omadused. Näiteks "aminohapete" määratlusse kuuluvad fenüülalaniini või proliini analoogid või mimeetikumid, mis võimaldavad peptiidide samasugust konformatsioonilist piirangut kui looduslikud Phe või Pro, ning on spetsialistidele hästi teada.

Selliseid analooge ja mimeetikume nimetatakse siin aminohapete "funktsionaalseks ekvivalendiks". Aminohapete ja nende analoogide teisi näiteid on andnud Roberts ja Vollaccio (The Peptides: Analysis, Sunthesis, Biology, Eds Grass ja Meienhofer, Vol.5, lk 411, Academic Press, Inc., N.Y. 1983). Aminohapete, aminohapete analoogide ja mimeetikumide lühendid on toodud tabelis 1.

Käesolevas kirjelduses kasutatud termin "Xa aktiivsus" viitab faktori Xa võimele üksi või kombinatsioonis protrombinaasikompleksina tuntud subühikutega katalüseerida protrombiini konversiooni trombiiniks. Kui kasutatakse Xa faktori aktiivsust, tähendab termin "inhibeerimine" nii Xa faktori otsest kui kaudset inhibeerimist. Faktori Xa aktiivsuse otsest inhibeerimist võib teostada näiteks leiutisekohase YIR-peptiidi sidumisel faktoriga Xa või protrombinaasiga, et vältida protrombiini seondumist protrombinaasi kompleksi aktiivse keskusega. Teguri Xa aktiivsuse kaudset inhibeerimist võib teostada, näiteks seondudes leiutisekohase ühendiga lahustuva faktoriga Xa, vältimaks selle inkorporeerumist protrombinaasi kompleksi.

Kasutatuna Xa faktori aktiivsuse inhibeerimisel tähendab termin "spetsiifiline" seda, et YIR-peptiid võib inhibeerida faktor Xa aktiivsust, ilma et see avaldaks inhibeerivat toimet teiste määratletud proteaaside aktiivsusele, kaasa arvatud plasmiin ja trombiin (samas inhibiitori kontsentratsioonis). Sellised proteaasid osalevad vere hüübimises ja kaskaadi fibrinolüüsis (vt tabel 2; vt ka näidet XXVII).

Tabelis 2 toodud tulemused näitavad, et leiutisekohased YIR-peptiidid sobivad Xa faktori inhibiitoritena, kuid ei inhibeeri oluliselt teiste seriinproteaaside, nagu trombiini või plasmiini aktiivsust, mis on seotud vere hüübimise ja fibrinolüüsi protsessiga.

Siin kasutatuna viitab mõiste "asendaja" mistahes erinevatele keemilistele rühmadele, mis sisestatakse peptiidi või peptiidi analoogi, mimeetikumi või orgaanilise ühendi peptiidi või külgahela peaahelasse. Asendaja võib olla ükskõik milline eriala asjatundjatele tuntud (vt näiteks Giannis ja Kolter, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 32: 1244-1267 (1993)). Selles kirjelduses on toodud mitmeid näiteid, mis näitavad erinevaid asendajaid, sealhulgas näiteks pNH sisestamist2 asendaja fenüülalaniinis, et saada F (pNH2) ja halogeeni sisestamine türosiinis, saades näiteks Y (3-1) või Y (3,5-1). Lisaks võib asetäitja olla näiteks heteroaatom, nagu lämmastik (N; vaata näiteks Pal), hapnik (O; vaata näiteks O-metüül-türosiin) või väävel (S; vaata näiteks Tyr (SO3H)), mis võib sisaldada asetäitjat. Seega, N-, S- või O-sisaldav fragment, nagu -SO3H, loetakse asendusliikmeks.

Lisaks võib asetäitja olla rühm, mis kaitseb aminorühma või karboksüülrühma.

Siin kasutatuna kasutatakse terminit "alküül" kõige laiemas tähenduses, mis tähistab küllastunud või küllastumata, lineaarseid, hargnenud või tsüklilisi ahelaid, milles on umbes 1 kuni 13 C aatomit, seega hõlmab termin "alküül" näiteks metüüli, etüüli, n-propüüli, isopropüüli. sekundaarsed butüül-, 1-metüülbutüül-, 2,2-dimetüülbutüül-, 2-metüülpentüül-, 2,2-dimetüülpropüül-, n-pentüül- ja n-heksüülrühmad, alküleenrühmad, karbotsüklilised rühmad, nagu tsükloheksüül- ja tsüklopentüülrühmad, samuti lineaar- või hargnenud ahelad ja karbotsüklilised ahelad, nagu metüültsükloheksüül või tsükkel lopropil-metüleen. Lisaks tuleb meeles pidada, et alküülrühm võib sisaldada asetäitjat. Sarnaselt kasutatakse terminit "atsüül" kõige laiemas tähenduses, mis tähistab küllastunud või küllastumata, lineaarseid, hargnenud või tsüklilisi ahelaid, milles on umbes 1-13 süsinikuaatomit ja mis sisaldavad karboksüülrühma. Seega hõlmab termin "atsüül" näiteks selliseid rühmi nagu formüül, atsetüül, bensoüül jms.

Termin "arüül" viitab aromaatsetele rühmadele, mis sisaldavad 5-13 süsinikuaatomit ja vähemalt üks "tsükkel", millel on pi-elektronide konjugeeritud süsteem. Arüüli näited on näiteks heterotsüklilised arüülrühmad, diarüülrühmad, nende analoogid ja derivaadid, mis võivad sisaldada ühte või mitut asendajat.

Termin "arüülalküül" viitab eespool määratletud alküülrühmale, mis on asendatud arüülrühmaga. Sobivateks arüülalküülrühmadeks on bensüül, pikolüül jms, mis kõik võivad olla asendatud.

Käesolevas kirjelduses kasutatakse ka termineid "heteroalküül", "heteroarüülalküül" ja "heteroarüül" ning need viitavad vastavalt alküül-, arüülalküül- ja arüülrühmale, mis on asendatud ühe või mitme heteroaatomiga, nagu N, O või S-aatomid. kasutatakse tsüklilise alküül- või arüülrühma suhtes, mis on asendatud ühe või mitme heteroaatomiga. Mitmed näited heteroalküülidest, heteroarüülalküülidest, heteroarüülidest ja heterotsüklitest on toodud näiteks tabelites 1 ja 3 ning tuntud ka tehnika tasemest.

Leiutisekohaseid peptiide võib modifitseerida terminaalsete N- või C-sisaldavate järjestustega, kasutades rühma, mis asendab vastavalt aminorühma või karboksüülrühma.

Selles kirjelduses on toodud mitmeid selliseid modifikatsioone (vt näiteks tabelit 3). Peptiidi või peptiidi analoogi N-sisaldavat terminaalset rühma võib keemiliselt modifitseerida nii, et terminaalne aminorühm on asendatud näiteks atsetüül-, tsüklopentüülkarboksüül-, isokinolüülkarboksüül-, furüül-, tosüül-, pürasinkarboksüül- või muu sarnase rühmaga, mis võib olla asendatud eespool kirjeldatud asendajaga. Terminaalne aminorühm võib olla ka asendatud näiteks pöörduva amiidsidemega. Tuleb meeles pidada, et terminit "aminorühm" kasutatakse siin laias tähenduses, viidates mis tahes vabale aminorühmale, kaasa arvatud peptiidis olev primaarne, sekundaarne või tertsiaarne aminorühm. Sellega võrreldes tähendab "N-terminaalne" järjestus peptiidis sisalduva esimese aminohappe alfa-aminorühma, mille valem on kirjutatud tavapärasel viisil.

Leiutisekohase peptiidi N-terminaalset rühma saab kaitsta, kinnitades sellele aminorühma kaitserühma. Terminit "aminorühma kaitsmine" kasutatakse siin laias tähenduses, tähistades keemilist rühma, mis võib reageerida vaba aminorühmaga, kaasa arvatud näiteks alfa-aminorühm, mis asub leiutise peptiidmolekuli otsas. Viimastega suheldes kaitseb kaitsev rühm teisiti reaktiivset aminorühma soovimatute reaktsioonide eest, mis võivad tekkida näiteks sünteesi ajal või eksopeptidaasi aktiivsuse tõttu lõppühendis. Aminorühma modifitseerimine võib samuti pakkuda täiendavaid eeliseid, kaasa arvatud näiteks ühendi lahustuvuse või aktiivsuse suurendamine. See kirjeldus kirjeldab erinevaid rühmi, mis kaitsevad aminorühma (vt tabel 3), samuti need, mis on tehnika tasemest tuntud ja hõlmavad näiteks atsüülrühmi, nagu atsetüül, pikolüül ja riivitud. butüülatsetüül, riivitud butüüloksükarbonüül-, bensüüloksükarbonüül-, bensoüülrühm, kaasa arvatud näiteks bensüüloksim, nagu 2-arüül-2-O-bensüüloksim (vt näide XVI), samuti aminoatsüüljääk, mida võib aminorühma kaitsev rühm muuta. Teisi aminorühma kaitserühmi on kirjeldatud näiteks publikatsioonis The Peptides, eds.Gross ja Meinhofer, Vol.3 (Academic Press, Inc., N. Y., 1981); ja Green ja Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis, 2-ndas väljaandes, lk 309-405 (John Wiley ja Sons, New York (1991)). Leiutisekohase peptiidi või peptiidi analoogi terminaalse aminorühma mistahes sellise modifikatsiooni saadus on viidatud "N-otsa derivaadi" kirjeldus.

Sarnaselt võib karboksüülrühma, näiteks peptiidis C-terminaalsena, olla keemiliselt modifitseeritud, kasutades karboksüülrühma. Terminit "karboksüülrühm" ja "C-terminaalne" kasutatakse analoogselt terminitega "aminorühm" ja "N-terminaalne", nagu eespool näidatud.

Karboksüülrühma, nagu see, mis sisaldub peptiidi C-terminaalses rühmas, saab modifitseerida, redutseerides C-terminaalse karboksürühma alkoholi või aldehüüdiks, või moodustades hammaste estri või asendades karboksürühma asendajaga nagu tiasolüül, tsükloheksüül või muu rühm. Hammaste estrid on hästi tuntud ja hõlmavad näiteks alkoksümetüülrühmi, nagu metoksümetüül-, etoksümetüül-, isopropoksümetüül- ja teised sarnased, alfa- (C1-C4alkoksüetüülid nagu metoksüetüül, etoksüetüül, propoksüetüül, isopropoksüetüül jms; 2-okso-1,3-dioksüleen-4-üülmetüülrühmad, nagu 5-metüül-2-okso-l, 3-dioksüleen-4-üülmetüülrühm jms; C1-C3-alküültiometüülid nagu metüültiometüül, etüültiometüül, isopropüültiometüül jms; atsüüloksümetüülrühmad nagu pivalüüloksümetüül-, alfa-atsetoksümetüülrühm jms; etoksükarbonüül-1-metüülrühm; alfa-atsüüloksü-alfa-asendatud metüülrühmad nagu alfa-atsetoksüetüül, 3-ftalidüül või 5,6-dimetüülftalidüül, 1- (C1-C4-alküüloksükarbonüüloksü) et-1-üülrühmad nagu 1- (etoksükarbonüüloksü) et-1-üül; ja 1- (C1-C4-alküülaminokarbonüüloksü) et-1-üülrühm nagu 1- (metüülaminokarbonüüloksü) et-1-üül.

Leiutise peptiidi võib modifitseerida karboksüülrühma kaitserühma lisamisega. Karboksüülkaitserühmad on hästi tuntud ja peptiidile kinnitamisel kaitsevad karboksürühma soovimatute reaktsioonide eest (vt näiteks Greene ja Wuts, supra, lk 224-276 (1991)).

Eriala asjatundjatele on teada, et ülalkirjeldatud modifikatsioone, mida võib läbi viia peptiidi N-terminaalse aminorühma või C-terminaalse karboksüülrühmaga, võib sarnaselt läbi viia mistahes reaktiivse aminorühma või karboksüülrühmaga, mis esineb näiteks aminohappe või aminohappe analoogi külgahelas. leiutisekohane peptiid. Selliste modifikatsioonide tegemise meetodeid on kirjeldatud allpool ja need on samuti tehnika tasemes tuntud.

Käesolev leiutis pakub ühendeid, mis inhibeerivad spetsiifiliselt faktor Xa toimet. Leiutise ühendil on üldine struktuur X1-YIR-X2 või on selle funktsionaalne ekvivalent, kus X1 "H" tähistab H, atsüüli, alküüli, arüülalküüli või ühte või enamat aminohapet ja X2 "Modifitseeritud C-terminaalne rühm" tähendab ühte või mitut rühma, mis kaitsevad karboksürühma, või ühte või mitut aminohapet või muud asendajat, näiteks aminorühma kaitsvat rühma.

Leiutise ühend on kasulik antikoagulandina erinevate kliiniliste haiguste ravis. Leiutisekohane ühend sobib samuti mitmesuguste laboratoorsete testide jaoks, et vältida vereproovide hüübimist.

Leiutis pakub ka ühendit, mis inhibeerib spetsiifiliselt faktor Xa aktiivsust ja üldvalemiga A1-A2- (A3)m-B, kus m = 0 või 1 ja A1 tähendab R1-R2-R3, A2 tähendab R4-R5-R6 ja A3 on R7-R8-R9; kus r1 valitud rühmast, kuhu kuuluvad 1-20 aminohapet; X on valitud rühmast, kuhu kuuluvad N, CH ja NC (O) ja R '1, R ''1 on valitud rühmast, kuhu kuuluvad alküül, atsüül, arüül, arüülalküül ja rühmad, mis kaitsevad aminorühma ja kus R1 võib olla asendatud; R2 tähendab -CR99R100, kus r99 ja R100 sõltumatult valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, alküül, arüülalküül, heteroarüülalküül ja heteroarüül ning kus R99 ja R100 sõltumatult võib olla asendatud; R3 valitud rühmast, kuhu kuuluvad -C (O) -, -CH2-, -chr99-C (O) - ja -C (O) -NR35-CH2-C (O) -, kus R35 keskmine kr55 silla rühm - C (O) -CR55-; R4 valitud rühmast, kuhu kuuluvad -CH2- ja -NR50-, kus r50 valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, alküül, arüülalküül ja heterotsükkel; R5 tähendab = CR201R202, kus r201 ja R202 sõltumatult valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, alküül, arüül ja arüülalküül ning kus R201 ja R202 sõltumatult võib olla asendatud; R6 "asendaja" tähendab asendajat, mis on valitud rühmast, kuhu kuuluvad -C (O), -CH2- ja -chr99-C (O) -; R7 valitud rühmast, kuhu kuuluvad -CH2- ja -NR51, kus r51 "H" tähendab H, alküül-, arüülalküül-, heteroalküül- ja heteroarüülalküülrühma ning ükskõik milline neist radikaalidest on asendatud asendajaga, mis on valitud rühmast, kuhu kuuluvad Q ja - (CH2)n-Q, kus n = 1-5 ja Q on valitud rühmast, kuhu kuuluvad amiin-, amidiin-, imidasool- ja guanidiinrühmad, mis võivad olla asendatud, ning mono-, di-, tri- või tetraalküülammoonium farmatseutiliselt vastuvõetavad soolad, selle isoureid või isotioureid; R8 tähendab -CR210R211-, kus r210 ja R211 on sõltumatult valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, alküül-, alküülarüül- ja heterotsükkel, kusjuures ükskõik milline neist radikaalidest on valikuliselt asendatud asendajaga, mis on valitud rühmast, kuhu kuuluvad Q või - (CH2)n-Q, kus n = 1-5 ja Q on valitud rühmast, kuhu kuuluvad amiin-, amidiin-, imidasool- ja guanidiinrühmad, mis võivad olla asendatud, ning mono-, di-, tri- või tetraalküülammoonium farmatseutiliselt vastuvõetavad soolad, selle isoureid või isotioureid; R9 valitud rühmast, kuhu kuuluvad -C (O) -, -CH2- ja -chr99-C (O); ja kus, kui m = 1, B on valitud rühmast, kuhu kuuluvad 1-20 aminohapet, -NHR52, -NR60R61-, VÕI70 ja -chr60R61, kus r52 valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, alküül, arüülalküül, heteroarüülalküül ja heteroarüül; kus r60 ja R61 sõltumatult valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, alküül, arüülalküül, arüül, heteroarüülalküül ja kus, kui m = 0, B on valitud rühmast, kuhu kuuluvad 1-20 aminohapet, -OR70, -NHR52 ja NR60R61, mis on ühendatud R-ga6 amiidsideme või estri sideme; kus B võib olla asendatud asendajaga tingimusel, et kui R3 tähendab -CH2- või -chr99-C (O) -, R4 tähendab NR50; kui r4 tähendab -CH2-, R3 tähendab -C (O) - või - chr99-C (O) -, R4 tähendab NR50; kui r4 tähendab -CH2-, R3 tähendab -C (O) - või -chr99-C (O) -; kui r6 tähendab -CH2-, R7 tähendab -NHR51-; kui r7 tähendab -CH2-, R6 tähendab -C (O) - või -chr99-C (O) -; kui r4 tähendab -NR50- ja R1 keskmine R50 ja r '1 moodustavad koos sildrühma valemiga -C (O) -chr55-, kus on chr55 on R50 ja karbonüülrühm on R '1, ja R "1 ja R55 sõltumatult H, C1-C6-alküül või arüülalküül; ja kui r3 tähendab -C (O) -NR35-CH2-C (O) -, siis R4 tähendab -NR50-, R1 keskmine R35 ja r '1 moodustavad koos sildrühma valemiga -C (O) chr55-, kus C (O) on R '1 ja chr55 on R35; R ''1 ja R55 sõltumatult H või C1-C6-alküülrühm (vt näiteks joonist 2).

Leiutisekohane ühend võib sisaldada tsüklilist N-terminaalset rühma, mille moodustab R1, R2, R3 ja soovi korral R4. Selline ühend on määratud näiteks struktuuriga A1-A2- (A3)m-B, nagu eespool kirjeldatud, kus R4 tähendab -NR50-, R1 keskmine R50 ja r '1 moodustavad koos sildrühma valemiga -C (O) -chr55, kus r55 tähendab H; R1 on H või metüül; R99 ja R100 sõltumatult valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, arüülalküül, alküül ja heteroalküül või 1-3 süsinikuaatomit ja kus R99 ja R100 Seda võib täiendavalt ühendada rühmaga, mis on valitud rühmast, kuhu kuuluvad fenüül, tienüül-, püridüül-, naftüül-, tionaftüüli, indolüül- või küllastatud alküül-, monoalküülamino, dialküülamino, tetraalküülammooniumisoolad arüülalküülamino- ainoalkilaril, karboksüül-, halogeen-, hüdroksüül-, amino-, amido-, amidino, guanidino, triasolüül ja sulfonüül ja R3 on valitud rühmast, kuhu kuuluvad -C (O) - ja -C (O) -NR35-CH2-C (O) -.

Lisaks on ühendis A1-A2- (A3)m-B R '1 ja R "1 võib sisaldada kuni kuut asendajat, kaasa arvatud näiteks alküülrühm, ja võib olla seotud rühmaga, nagu -OCH2-, -Sch2-, = N-CH2-, = NC (O) -, -CO- või -NY-CO-NZ, kus Y ja Z võivad olla H, alküül-, arüülalküül- või heteroaralküülrühm. Lisaks R99 ja R100 sõltumatult võib olla asendatud asendajaga, nagu fenüül, tienüül, tiasolüül, püridüül, naftüül, tionafül või indolüül, või küllastunud rühm, mis võib sisaldada kuni viit rühma, mis on valitud alküüli, alkoksü, mono-, di- või trialküülamiini, tetraalküülammooniumi, arüülalküülamiini hulgast aminoalküül, karboksü, halogeen, hüdroksü, amino, amido, amidino, guanidino, triasolüül või sulfonüül.

Eelistatud ühend R asendajatega2-asend on ühend, kus R100 "H" ja "R"99 tähendab või
kus W asendatud ühendis võib olla näiteks halogeen, hüdroksüül, amino või amidino rühm ja J võib tähendada näiteks O, S või -NR, kus R on H või alküül, arüül või arüülalküül.

Leiutisekohane ühend, mis sisaldab asendajaga asendatud asendajat A2 ja millel on faktor Xa inhibeeriv toime, võib näiteks asendada R juures50, R201 või R202 üks või mitu heteroaatomit, nagu N, O või S. R202 võib olla asendatud ka asendajaga, mis on valitud:

kui X on C, N või S, siis R puudub või võib olla H või alküül, mis võib olla asendatud heteroaatomiga ja n = 1-5.

Leiutisekohane ühend, mis sisaldab segurit A3 juures ja millel on inhibeeriv toime faktor Xa vastu, võib hõlmata näiteks R asendamist.51 üks või mitu asendajat, nagu H, alküül, arüülalküül või heterotsükkel, mis võib olla ka asendatud heteroaatomiga, nagu N, O või S.

R210 ja R211 võib tähendada näiteks asendajat - (CH2)n-Q, kus n on umbes 1-5 ja kus Q on amino, amidino, uurea, imidasool, guanidiin, mono-, di-, tri- või tetraalküülammoonium, farmatseutiliselt vastuvõetav sool, selle isoureid või isotioureid. Lisaks R210 või R211 võib olla näiteks alküül, arüül või alküülarüül. Need rühmad võivad olla asendatud ka asendajaga, nagu hüdroksüül või C1-C4-alkoksü.

Leiutise ühendil võib olla alternatiivne B-fragmendi paigutus, mis moodustab fragmendi B. Selline asendajate alternatiivne paigutus võib sisaldada näiteks asendust R52 lämmastik, hapnik või väävel või R asendamine60, R61 või R70 üks või mitu heteroaatomit või alküülrühma.

Siinkirjeldatud üldstruktuurid esindavad erinevaid leiutisekohaseid ühendeid, mis säilitavad inhibeeriva toime faktor Xa suhtes, nagu näiteks sisemine YIR tripeptiid. Siin kirjeldatud struktuurid hõlmavad ka ühendeid, mis sisaldavad ebaloomulikke aminohappeid, aminohappe mimeetikume ja teisi orgaanilisi struktuure ning sarnase funktsiooniga asendajaid.

Sellised funktsionaalsed ekvivalendid tagavad soovitud laengute ja jõudude sobivad ruumilised rühmitused, mis annavad efektiivse inhibeeriva toime faktor Xa vastu.

Leiutise ühendite spetsiifilised näited hõlmavad näiteks:
Ac-Tyr-Ile-Arg-Leu-Ala-NH2; Ac-Tyr-Ile-Arg-Leu-Pro-NH2; Ac- (iBu) Tyr-Ile-Arg-Leu-Ala-NH2; Ac-Tyr-Il-Arg-Leu-N (CH3) O (CH3); Ac-Tyr-2NH)> - Ile-Arg-Leu-Pro-NH2; Ac-Tyr-Ile-Arg-NH-CH2(4-püridiil); Ac-Tyr-Ile-2NH)> -Arg-Leu-Pro-NH2; Ac-Tyr-Chg-Arg (NO2) -2NH)> - Leu-NH2; Ac-Tyr-Ile-Arg-< Y(COCH2)> -Gly-Pro-NH2; Ac-Tyr-Ile-Dab (Ny-C3H7N) -Leu-Ala-NH2; Ac-Tyr-Ile-PaIMe (3) -NH2; Tyr-Ile-Arg-NH2; D-Tyr-Ile-Arg-Leu-Pro-NH2, Ac- (Bzl) Gly- (Chx) Gly- (3-guanidopropüül) Gly-NH2; Tsüklo (Gly-Tyr-Ile-Arg-Gly); Tfa- (iBu) Tyr-Chg-Arg-Leu-Pro-NH2; Ac-pAph-Chg-Arg-Leu-Pro-NH2; ja Ac-Nal (2) -Chg-Arg-Leu-Pro-NH2. Teised leiutisekohased YIR-peptiidid on näidatud näiteks tabelites 3 ja 5.

Käesolev leiutis käsitleb ka ühendit struktuuriga A1-A2- (A3)m-B, kus R1 tähendab

R '1 valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, -CO-Ra, -SO2-Ra, aminorühma kaitserühm, 1-6 aminohapet, mis võivad olla asendatud, ja kus nimetatud 1-6 aminohappe N-terminaalne rühm on asendatud asendajaga, mis on valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, -CO-Ra, -SO2-Ra ja aminorühma kaitserühm; ja kus Ra valitud rühmast, kuhu kuuluvad alküül, arüül ja heteroalküül; R ''1 valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, atsüül ja alküül; X on N; R2 tähendab -chr99-, kus r99 valitud rühmast, kuhu kuuluvad alküül, arüül, arüülalküül, heteroalküül ja heteroarüül, mis võib olla asendatud asendajaga, mis on valitud rühmast, kuhu kuuluvad 1-6 fluori aatomit, kloori, broomi, joodi, 1-6 aminorühma, nitro rühmi, amidiinrühmi, amido rühmi, karboksürühmad, esterrühmad, eetrirühmad ja hüdroksüülrühmad; R3 tähendab -C (O) -; R4 tähendab -NH-; R5 tähendab -chr201-, kus r201 on alküül; R6 tähendab -C (O) -; R7 tähendab -NH-; R8 tähendab -chr210-; kus r210 on heteroalküül, millel on vähemalt üks ametlik positiivne laeng, kus 1-6 lämmastikuaatomid on heteroaatomid; R9 tähendab -C (O) -; ja B on valitud rühmast, kuhu kuuluvad -ORb ja -N-RcRd, kus rb valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, alküül ja karboksü kaitserühm, Rc on valitud rühmast, kuhu kuuluvad H ja alküülrühm ja Rd valitud rühmast, kuhu kuuluvad alküül-, heteroalküül- ja 1-20 aminohapped, mis võivad olla asendatud asendajaga ja kus C-terminaalne rühm võib olla modifitseeritud karboksü-kaitserühmaga, primaarse amiidrühmaga või tsüklilise peptiidi osaga, moodustades sekundaarse või tertsiaarse amiidi rühma radikaali R aminorühmaga1. Selline ühend võib sisaldada ühte või enamat amino-kaitserühma.

Näiteks sisaldab leiutisekohane ühend A1, mis on valitud rühmast, kuhu kuuluvad Tyr, F (pNH2), mAph, pAph ja Nal (2), mis sisaldavad 0 või 1 amino-kaitserühma; A2 on valitud rühmast, kuhu kuuluvad Arg, PalMe (3), Dab (N-C3H7N), Dap (N-C3H7N) ja Orn (N-C3H7N); ja B on valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, OH, NH2, 1 kuni 5 aminohapet või nende funktsionaalsed ekvivalendid ja karboksü-kaitserühm. Selliste ühendite näited hõlmavad Ac-pAph-Chg-PaIMe (3) -NH-CH2-CHx; Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -NH-Chx; Bzf-pAph-Chg-PaIMe (3) -NH2; tsüklopentüül-CO-pAph-Chg-PalMe (3) - NH2; 3Iqc-pAph-Chg-PaIMe (3) -NH2; 2-furoüül-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2; 5-Me-tienüül-CO-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2; ja Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -ol (vt ka tabel 5).

Lisaks käsitleb leiutis ühendit struktuuriga A1-A2-B, nimelt A1-A2- (A3)m-B, kus m = 0.

Sellises ühendis B võib tähendada heteroarüülalküülrühma, nagu (4- (N-metüülpüridiinium)) metüül; 2- (3- (N-metüülpüridiinium)) metüül; 2- (3- (N-metüülpüridiinium)) metüül; 2- (3- (N-metüülpüridiinium) et-1-üül; 1- (4- (N-metüülpüridiinium)) -et-1-üül; (n-amidiin) bensüül; 2- (4- (N-metüülpüridiinium) )) prop-1-üül ja 2- (4- (N-metüülpüridiinium)) et-1-üül, Ac-pAph-Chg-AMP (4) ja Ac-pAph-Chg-AEMP (4) on sellised näited. ühendid.

Valik L- või D-aminohapete lisamise kohta leiutisekohasesse ühendisse võib osaliselt sõltuda peptiidi soovitud omadustest. Näiteks võib ühe või mitme D-aminohappe lisamine anda ühendile suurema stabiilsuse in vitro või in vivo. Ühe või enama D-aminohappe lisamine võib samuti suurendada või vähendada ühendi farmakoloogilist aktiivsust. Mõnel juhul võib olla soovitav, et ühend jääks aktiivseks ainult lühikest aega.

Sellistel juhtudel võib ühe või mitme L-aminohappe lisamine ühendisse lubada inimorganismis endogeenseid peptidaase ühendit in vivo imenduma, piirates seeläbi toimeaine mõju kehale.

Spetsialist võib määrata leiutisekohaste ühendite soovitud soovitud omadused, võttes arvesse näiteks patsiendi vanust ja üldist tervist.

Leiutisekohast ühendit võib sünteesida, kasutades näiteks automaatset süntesaatorit (vt näide 1).

Reaktiivse rühma selektiivne modifitseerimine, nagu aminohappe külgahelas olev rühm või peptiidis olev N-terminaalne või C-terminaalne reaktiivne rühm, võib anda ühendile soovitud omadused, nagu suurenenud lahustuvus või parem inhibeeriv toime.

Kui kasutatakse tahkefaasilise sünteesi meetodeid, võib ühendi keemilist koostist manipuleerida siis, kui peptiid liitub vaiguga või pärast peptiidi lõhustamist vaigust, et saada näiteks N-otsa derivaat, näiteks N-terminaalne atsüülitud ühend.

Selliseid modifikatsioone võib läbi viia ka ühendi karboksüülrühmaga, kaasa arvatud C-terminaalse karboksüülrühmaga, mis võib olla näiteks amideeritud.

Spetsialist võib sünteesida ka YIR-peptiidi, kasutades sünteesi meetodit lahustikeskkonnas. Sünteesitud ühendit saab puhastada hästi tuntud meetoditega nagu pöörduv kõrgefektiivne vedelikkromatograafia (HPLC, vt näide 1) või muud isoleerimismeetodid, mis põhinevad näiteks ühendi suuruse, laengu või hüdrofoobsuse kasutamisel. Leiutise ühendi struktuuri iseloomustamiseks võib kasutada ka tuntud meetodeid, nagu aminohapete sekveneerimine või massispektromeetria (MS).

Leiutisekohased YIR-peptiidid võivad olla lineaarsed või tsüklilised (vt näiteks tabelit 3 allpool). Tsüklistamist võib läbi viia, moodustades silla kahe mitteseotud jäägi, fragmendi või asendaja vahel, mis võivad olla YIR fragmendis või väljaspool seda.

Tsüklistamist võib läbi viia ka näiteks YIR-i fragmendi koostise ühe jäägi ja YIR-järjestusest väljaspool oleva mitteseotud jäägi, fragmendi ja asendaja vahelise silla moodustamise teel.

Näiteks võib peptiide või peptidomimeetikume tsükliseerida, moodustades S-S, -CH sidemeid2-S-, -CH2-O-CH-, laktaami- või estersidemed või eelnevalt kirjeldatud tuntud meetodid (vt Hruby, Life Sci. 31: 189-199 (1982); Toniolo, Int.J.Pept.Prot.Res. 35: 287-300 ( 1990), Kates et al., Tetr. Lett. 34: 1549-1552 (1993)).

Terminit "väljaspool YIR fragmenti" kasutatakse YIR-järjestuse või selle ekvivalendi mitte-türosiini, isoleutsiini või arginiinijäägi all, nagu on leitud leiutise YIR-peptiidis.

Vastupidiselt sellele tähendab väljend "YIR fragmendi koostises" vähemalt ühte türosiinijääki, isoleutsiini ja arginiini YIR järjestust või selle ekvivalenti. Termin "sild" seoses tsüklilise ühendiga tähendab sidet, mis on moodustunud kahe mitteseotud aminohappe vahel, mis on leitud leiutise YIR-peptiidis.

Tsüklistamist on võimalik saavutada, moodustades näiteks disulfiidsideme või laktaami sideme X1 ja X2 vahel. Disulfiidsideme moodustamiseks võimelised jäägid hõlmavad näiteks Cys, Pen, Mpr ja Mpp ning selle ekvivalente, mis sisaldavad 2-aminorühmi.

Jäägid võimelised moodustama laktaamsideme silla hõlmavad näiteks, Asp, Glu, Lys, Orn, alfa, beeta-diaminopropioonhape, alfa-aminoadiinhape, alfa, gamma-diaminovõihape, diaminouksusnuyu hape, aminobensoehape ja merkaptobensoehappest. Siin kirjeldatud ühendeid saab tsükliseerida, näiteks laktaamsideme kaudu, mis võib kasutada ühe külgahela rühma, mis moodustab ühe külgneva jäägi kovalentse sidumise N-terminaalse aminorühma X1 või Y külge. leiutisekohased, sealhulgas näiteks peptiidid ja peptidomimeetikumid, mida saab tsükliseerida SS, -CH sidemete kaudu2-S-, -CH2-O-ch2-, laktaam, ester või muud sidemed (vt näiteks Hruby, Supra, 1982; Toniolo, Supra, 1990; Kates et al. Supra, 1993).

Leiutisekohast ühendit võib saada homogeensena või ühendite seguna, mis sisaldab erinevaid asendajate kombinatsioone.

Suur valik asendajaid võimaldab teil reguleerida peptiidühendi analoogide füüsikalis-keemilisi omadusi.

Asendaja valik mõjutab ka ühendi sideainet (vt näiteid).

Erinevatel asenduskohtades sisalduvatel ühenditel on erineva tasemega inhibeeriv toime faktor Xa suhtes. Need ühendid sünteesiti näidetes kirjeldatud meetoditega. Peptiidide testimine inhibeeriva aktiivsuse jaoks viidi läbi, kasutades näites XXXVII ja XXXVIII kirjeldatud meetodeid. Kasutades selliseid meetodeid, võib spetsialist siin kirjeldatud ühendi sünteesida, kaasa arvatud selle modifikatsioon, ja määrata Xa faktori inhibeeriva toime.

Leiutis pakub ühendeid, mis inhibeerivad spetsiifiliselt faktor Xa aktiivsust.

Selliste ühendite Ki väärtus on faktori Xa aktiivsuse suhtes 100 μm, eelistatult 2 nm ja praktiliselt ei inhibeeri teiste koagulatsioonis ja fibrinolüüsis osalevate proteaaside aktiivsust (vt tabel 2). Sellised teised proteaasid hõlmavad näiteks trombiini ja plasmiini. Leiutise ühendite spetsiifilisus on toodud allpool näites XXXVII (vt ka tabel 2).

Leiutisekohast ühendit võib soodsalt kasutada antikoagulandina, mida võib koagulatsiooni vältimiseks kontakteeruda vereprooviga. Näiteks võib leiutisekohase ühendi efektiivse koguse kontakteeruda värskelt tõmmatud vereprooviga selle koagulatsiooni vältimiseks. Terminit "efektiivne kogus", mida kasutatakse seoses leiutisekohaste ühenditega, tähendab ühendi kogust, mis inhibeerib faktor Xa aktiivsust. Spetsialist on hästi teadlik, et efektiivset kogust leiutisekohast ühendit saab määrata, kasutades siin kirjeldatud meetodeid (vt näited XXXVII ja XXXVIII), samuti tuntud meetodeid.

Pidades silmas leiutisekohase ühendi kirjeldatud kasulikkust, mõistab asjatundja, et ainet, näiteks hepariini, võib asendada leiutise ühendiga. Selline leiutisekohase ühendi kasutamine võib näiteks tuua kaasa kulude kokkuhoiu võrreldes teiste antikoagulantidega.

Lisaks võib leiutisekohast ühendit kasutada mitmesuguste kliiniliste haiguste ravimiseks, sealhulgas näiteks südame-veresoonkonna haiguste ja komplikatsioonide raviks, mis on seotud näiteks nakkuse või operatsiooniga.

Komplikatsioonide näited pärast operatsiooni hõlmavad kroonilist ja proksimaalset tromboflebiiti, mis võib tekkida pärast operatsiooni. Seega on leiutisekohane ühend kasulik ravimina soovimatu vere hüübimise vähendamiseks patsiendil.

Kuna leiutisekohane YIR-peptiid võib inhibeerida faktor Xa aktiivsust, võib selline ühend olla sobiv vere hüübimise vähendamiseks või inhibeerimiseks indiviidil. Siin kasutatuna tähendab termin "individuaalne" selgroogset, kaasa arvatud imetajat, nagu inimene, kus faktor Xa osaleb kaskaadi koagulatsioonis.

Vere koagulatsiooni indiviidis võib vähendada või vältida, manustades indiviidile leiutisekohase YIR-peptiidi terapeutiliselt efektiivse koguse. Terminit "terapeutiliselt efektiivne kogus" kasutatakse YIR-peptiidi annuseks, mida indiviidil tuleb indiviidil Xa-faktori toime inhibeerimiseks manustada. Täpsemalt, leiutisekohase ühendi terapeutiliselt efektiivne kogus inhibeerib faktor Xa katalüütilist aktiivsust kas otse protrombinaasi kompleksis või üksuse lahustuva derivaadina või kaudselt, inhibeerides faktor Xa inkorporeerumist protrombinaasi kompleksisse. Täpsemalt, sellised ühendid võivad inhibeerida faktor Xa aktiivsust Ki + -ga): leitud 659,4, arvutatud (arvutatud) 659,9.

Näide III Ac-Tyr-Ile-Arg-Leu-Pro-NH süntees2
Ac-Tyr-Ile-Arg-Leu-Pro-NH sünteesiks2 1 g Rink'a vaiku (0,6 mmol NH2/ g vaik), mida kasutatakse näites 1 kirjeldatud meetodis. Saadud peptiidi iseloomustab: (M + H) +: leitud 685,4, arvutatud: 685,9.

Näide IV Ac- (iBu) Tyr-Ile-Arg-Leu-Pro-NH süntees2
Kasutage 1 g vaiku Rink'a (0,6 mmol NH2/ g vaik).

Kasutage tahke faasi üldist sünteesimeetodit. Pärast Tyr vabanemist ja peptiidi korralikku pesemist lisatakse DMF-le, mis sisaldab 2% jää-äädikhapet, 50 ekvivalenti isobutüraldehüüdi. Saadud segu loksutati 4 tundi toatemperatuuril. Pärast peptiidi pesemist DMF-ga, mis sisaldab 2% äädikhapet (2 x 8 ml), lisatakse 1 g NaBH.3CN 10 ml DMF-s, mis sisaldab 2% äädikhapet. Peptiidvaiku loksutatakse 30 minutit, seejärel filtritakse ja lisatakse värske NaBH segu.3CN DMF / äädikhappe segus jätkatakse reaktsiooni veel 30 minutit

Seejärel pesti peptiidvaiku DMF / 2% äädikhappe (2 x 8 ml) ja DMF (2 x 8 ml) seguga. Saadud monoalküülitud peptiidvaigu atsetüülitakse etüülanhüdriidi ja trietüülamiini seguga DMF-s (30 ekv, 6 h).

Pärast peptiidi nõuetekohast pesemist lõhustatakse ja vabastatakse peptiid näites I kirjeldatud viisil.

Peptiidi puhastatud HPLC analüüsiti massispektromeetria abil. (M + H) +: leitud 758,4, arvest. 758,5.

Näide V. Tfa- (iBu) Tyr-Ile-Arg-Leu-Pro-NH süntees2
Sama protseduuri, mida on kirjeldatud näites IV, kasutatakse (iBu) Tyr-Ile-Arg-Leu-Pro-Rink vaigu valmistamiseks. Lõplik trifluoroatsetüülimine viiakse läbi, töödeldes peptiidvaiku 0,7 M trifluoroäädikhappe anhüdriidiga diisopropüületüülamiini (DIEA) ja N-metüülimidasooli (NMI) juuresolekul (1: 3: 0,3 ekv.) 45 minutit.

Peptiidi lõhustamine vaigust ja peptiidi eraldamine viiakse läbi nagu on kirjeldatud näites IV. Puhastatud peptiid, mis on identifitseeritud MS meetodil. (M + H) +: leitud 812,4, arvest. 812,5.

Näide VI Ac-Tyr-Ile-Arg-N süntees (CH3) O (CH3).

Boc-Arg (Ng-Tos) -N (CH3) O (CH3) teostatud vastavalt kirjanduses kirjeldatud meetodile (Fehrentz ja Castro, Supra, 1983). Boc-Arg (N-Tos) -N (CH3) O (CH3) (200 mg) segatakse 5 ml trifluoroäädikhappega (TFA) toatemperatuuril ja segatakse 20 minutit. Algühendi kadumist kontrollitakse õhekihikromatograafiaga (TLC), kasutades CHC13 : MeOH: CH3COOH (90: 9: 1) ja tuvastatakse visuaalselt ninhüdriini pihustamise ja UV-valgusega. Ülejäänud TFA aurustamine vaakumis ja kuivatamine vaakumis KOH graanulitel annab tahke materjali, millel on sobiv mass. (M + H) + leitud 371,2, cal. 371.4.

Esimeses kolvis lahustatakse 150 mg ülalmainitud materjali 1 ml DMF-s, seejärel lisatakse 57 ui trietüülamiini ja segu jahutatakse temperatuurini 0 ° C. Teises kolvis lahustatakse 171 mg Z-Tyr-Ile-OH (Biochem Bioscience) veevabas tetrahüdrofuraanis (THF). Näiteks Philadelphia PA) ja jahutati temperatuurini -10 ° C, seejärel lisati lämmastikuatmosfääris 44 μl NNM-i μl isobutüülkloroformaati ja segu segati 15 minutit. Varem saadud Arg (Tos) N (CH3(OCH3) DMF-s lisatakse segatud dipeptiid Z-Tyr-Ile-OH anhüdriidile ja segu segatakse temperatuuril -10 ° C 30 minutit ja seejärel üleöö toatemperatuuril.

Pärast reaktsioonisegu töötlemist nagu on kirjeldatud näites I, kuivatatakse peptiid vaakumis ja väike osa puhastatakse HPLC-ga ja analüüsitakse MS-ga; peptiidil on eeldatav molekulmass (781). Saadud peptiid Z-Tyr-Ile-Arg (Tos) -N (CH3)) OCH3 segatakse 500 μl anisooliga ja blokeeritakse HF-ga tavalise meetodiga.

Pärast töötlemist 169 mg Tyr-Ile-Arg-N (CH3) O (CH3) ja identifitseeritakse MS meetodil (leitud 493,6, arvutatud 494).

Seejärel lahustatakse jääkpeptiid 1 ml 1 N HCl-s ja lüofiliseeritakse.

Tyr-Ile-Arg-N (CH3) OCH3 2HCI (76 mg) lahustatakse atsetonitriilis, jahutatakse temperatuurini 0 ° C ja lisatakse 13 μl püridiini ja seejärel 15 µl äädikhappe anhüdriidi. Segu segatakse 0 ° C juures 3 tundi ja reaktsiooni lõppu ninhüdriiniproovile. Pärast toatemperatuuril 8 tundi segamist töödeldakse reaktsioonisegu ja saadud produkt Ac-Tyr-Ile-Arg-N (CH3) OCH3 analüüsiti MS meetodil (leitud 535,6, arvutatud 535,3).

Näide VII Ac-Tyr- süntees< CH2NH)> - Ile-Arg-Leu-Pro-NH2
a) Fmoc-Tyr (But) -H süntees
4,6 g (10,0 mmol) Fmoc-Tyr (But) -OH, 2,1 g (10,1 mmol) ditsükloheksüülkarbodiimiidi (DCC), 1,26 g (10,1 mmol) bensüülmaptaptaani ja 0,12 g DMAP reageerib diklorometaanis, nagu on kirjeldanud Ho ja Ngu (J. Org. Chem. 58: 2315 (1993)).

Pärast töötlemist eraldatakse Fmoc-Tyr- (But) -S-CH.2C6H125 ja pärast tioeetri redutseerimist, segades trietüülsilaaniga 10% Pd juuresolekul süsinikul ja puhastades õhekihikromatograafiaga, saadakse Fmoc-Tyr (But) -H saagisega 81%. TMR andmed ja saaduse saagis on oodatud.

b) Fmoc-Tyr süntees (aga) -< (CH2NH)> - Ile- (O-allüül)
0,73 g (1,66 mmol) Fmoc-Tyr (But) -OH ja 0,209 g (3,32 mmol) NaBH-d3CN 20 ml 1% AcOH-s DMF-s lisatakse 0,516 g (1,82 mmol) TFA Ile- (O-allüül) lahusele 2 ml DMF-s. 2 tunni pärast töödeldakse reaktsioonisegu ja lõppsaadus puhastatakse kromatograafiaga õhukesel kihil (etüülatsetaat: heksaan, 35:65), et saada õli, mida iseloomustavad vastavad NMR ja MS andmed. (M + H): leitud 599, cal. 598,7.

c) Fmoc-Tyr süntees (aga) -< (CH2NH)> Ile-OH
K 0,467 g (0,78 mmol) Fmoc-Tyr (But) -< (CH2NH> -Ile-O-allüül 10 ml diklorometaanis lisatakse 89 μl (1,56 mmol) HOAc, 20 μl trietüülamiini (IEA) ja 0,02 g PdCl kompleksi2(Ph3)2.

Lisage kohe 231 μl (8,86 nmol) Bu3SnH ja segu segatakse 1 tund toatemperatuuril. Pärast reaktsioonisegu sobivat töötlemist puhastatakse saadus kromatograafiaga õhukesel kihil (CHCl3 MeOH, 20: 1), saades peptiidi saagisega 69% (0,319 g). (M + H +): leitud 559, arvest. 558.

Fmoc-Tyr (aga) -< (CH2NH)> Ile-OH seondub seejärel Arg (Pmc) -Leu-Pro-Rink vaiguga, kasutades üldist tahke faasi sünteesimeetodit, nagu on kirjeldatud näites I. Ac-Tyr (But) - märklaudpeptiidi vaik< (CH3NH)> - Ile-Arg (Pmc) -Leu-Pro-Rink blokeeritakse ja lõhustatakse vastavalt näites I kirjeldatule ja puhastatakse HPLC meetodil kolonnil C18.

Näide VIII. Ac-Tyr-Ile-Arg-NH-CH süntees2(4-püridüül) a
Oksiimi vaik (DeGrado ja Kaiser, J.Org. Chem. 45: 1295 (1980) (0,862 g, 0,6 mmol / g) seotakse öö läbi Boc-Arg (Tos) -OH-ga DIC / HOBt juuresolekul. pestakse DMF-ga, seejärel DCM-ga ja atsetüülitakse äädikhappe anhüdriidiga / DIEA-ga (1: 1 ekv.) DCM-s.

Pärast vaigu pesemist DCM, DMF ja DCM-ga, vabastatakse see 25% TFA-ga DCM-s 30 minutit. Saadud vaiku pestakse DCM, isopropanooli ja DCM-ga. TFK-ga. Arg (Tos) -OxmR seondub Boc-Ile-OH-ga sümmeetrilises anhüdriidivormis (3 ekv.) 1,5 ekv. DIEA manulusel DCM-s. Eespool kirjeldatud pesemis-, atsetüülimis- ja vabanemistsükleid korratakse. Pärast vabanemist lisatakse sidumine nagu Ile, Boc-Tyr (2-BrZ) OH, seejärel vabastatakse Boc-Tyr (2-BrZ) -Ile-Arg (Tos) -OxmR peptiidvaigu ja atsetüülitakse, et saada Av-Tyr (2-BrZ ) -Ile-Arg (Tos) -OxmR. Peptiidvaiku kuivatatakse vaakumis, et saada kaalutõus 0,216 g.

1/3-le sellest vaigust lisatakse 100 μl (800 μm) 4- (dimetüülamino) püridiini 60 μl jää-äädikhappe ja 120 μl DIEA juuresolekul 6 ml DCM-is.

Vaiku loksutatakse öö läbi toatemperatuuril. Pärast lahuse filtreerimist pestakse saadud vaiku 3 ml DMF-ga ja pesuveed ühendatakse DCM-filtraadiga. Pärast lahusti aurustamist deblokeeritakse saadud peptiid HF / anisooliga ja töödeldakse nagu tavaliselt, et saada sihtpeptiid. Tehke elektropihustus MS. (M + H) +: leitud 582,3, arvest. 582.

Näide IX Ac-Tyr-Ile süntees< (CH2NH)> - Arg-Leu-Pro-NH2
a) Boc-Ile-H süntees
Aldehüüd sünteesitakse 1 g Boc-Ile-N (Me) OMe-st, nagu on kirjeldanud Fehrentz ja Castro (Supra, 1983). Aldehüüd identifitseeritakse õhekihikromatograafia ja NMR abil, nagu on kirjeldatud selles viites.

b) Arg (Tos) -Leu-Pro-MBHA süntees
Tripeptiidvaigu süntees viiakse läbi tahkes faasis, nagu on kirjeldatud näites I.

c) Boc-Ile- süntees< (CH2NH)> - Arg (Tos) -Leu-Pro-MBHA
Boc-Ile-H on seotud Arg (Tos) -Leu-Pro-MBMA tripeptiidvaiguga, kasutades redutseerivat amiinimist NaBH abil3CN DMF-is, mis sisaldab 1% äädikhapet. Boc-rühm lõhustati nagu tavaliselt ja Ac-Tyr-OH ühendati DICK / HoBt abil.

Lõplik peptiidvaik (0,7 g) vabastatakse ja peptiid lõhustatakse vaigust, kasutades HF / tioanisooli segu. 19 g toores Ac-Tyr-Ile-< (CH2NH)> - Arg-Leu-Pro-NH2 puhastati HPLC abil C18 kolonnil, et saada umbes 5 mg> 90% puhast peptiidi. (M + H +): leitud 688,4, arvest. 687,9.

Näide X: Ac-Tyr-Ile-Dab (N-C.) Süntees3H7N) -Leu-Ala-NH2
0,2 g SCAL-TG (0,2 mmol NH2/ g) (Patek ja Lebl, Tetr. Lett. 32: 3891-3894 (1991)) seostatakse Fmoc-Ala-OH ja Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Dab (Boc) -OH, Fmoc-Ile-OH ja Fmoc-Tyr (But) -OH, kasutades näites I kirjeldatud meetodeid.

Pärast N-terminaalse rühma atsetüülimist ja TFA külgahela vabastamist peske Ac-Tyr-Ile-Dab-Leu-Ala-SCAL-TG peptiidvaigu, neutraliseerige ja töödeldakse 0,3 M PyBroP / NMI-ga DMF-s 2 tundi. Saadud peptiid lõhustatakse vaigust, kasutades 1M trifenüülfosfiini / (CH3)3SiCl DCM-s (3 x 1 tund), seejärel 100% TFA (1 tund). Pärast toorpeptiidi eraldamist dietüüleetriga sadestamise teel lüofiliseeritakse peptiid 0,1% TFA vesilahusest. Ac-Tyr-Ile-Dab peptiid (N-C3H7N) -Leu-Ala-NH2 puhastatakse HPLC ja MS abil. (M + H +): leitud 676,4, arvest. 676,4.

Näide XI. Ac-Tyr-Ile-PalMe (3) -NH süntees2
C 1,0 g Rink vaiku (0,48 mmol NH2/ g seob Fmoc-Pal (3) -OH, Fmoc-Ile-OH ja Fmoc-Tyr (But) -OH, kasutades näites I kirjeldatud meetodeid. 0,25 g saadud peptiidvaigu Fmoc-Tyr (But) - Ile-Pal (3) -Rink lisage DCM-ile 500 kriit-metüüljodiidi (MI) ja loksutage 6 tundi. Saadud Fmoc-Tyr (But) -Ile-PalMe (3) -Rink peptiidvaigu blokeeritakse ja atsetüülitakse ning lõhustatakse, nagu on kirjeldatud näites I. Osa toorest peptiidist puhastatakse HPLC meetodil ja viiakse läbi MS.

Näide XII. Ac-tsüklo (Glu-Tyr-Ile-Arg-Leu-Lys) -NH süntees2
1 g SCAL-TG (0,29 mmol NH2/ g) (vt näide X) on seotud Fmoc-Lys (Boc) -OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Arg (Pmc) -OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr (But) -OH ja Fmoc-Glu (OtBu) -OH, kasutades näites I kirjeldatud meetodeid.

Pärast Fmoc eemaldamist atsetüülitakse peptiidvaigu ja pestakse DMF-ga, seejärel DCM-iga. Ac-Glu (OtBu) -Tyr (But) -Ile-Arg (Pmc) -Leu-Lys (Boc) -SCAL-Tg peptiidvaigu vabastatakse reagendiga K, pestakse, neutraliseeritakse ja tsüklistatakse, kasutades BOP / HOBt / DIEA (5: 5: 5 ekv.) DMF-s 2 tundi. Seondumise lõppu reguleeritakse ninhüdriini lagundamisega, nagu on kirjeldanud Kaiser (Kaiser et al., Anal. Biochem. 34: 595 (1970)). Pärast tsüklistamist lõhustatakse peptiid vaigust, puhastatakse meetodiga GHUR ja MS. (M + H) +: leitud 844,5, arvest. 844,5.

Näide XIII Tsüklo süntees (Cly-Tyr-Ile-Arg-Gly)
1 g oksiimvaiku (vt näide VIII) (0,6 mmol NH2/ g) seostatakse üleöö Boc-Gly-OH-ga DIC / HOBt juuresolekul. Pärast pesemist ja blokeerimist kombineerivad vaigud Boc-Arg (Tos) -OH, Boc-Ile-OH ja Boc-Tyr (2BrZ) -OH kasutades näites VIII kirjeldatud meetodeid.

1/3 peptiidvaigust, Boc-Tyr- (2BrZ) -lle-Arg (Tos) -Gly-Oximest vabastatakse ja seostatakse Boc-Glyga, kasutades DICK / HOBt. Peptiidvaik deblokeeritakse, neutraliseeritakse ja tsüklistatakse üleöö DMF-is, mis sisaldab 1% äädikhapet. Vaik filtreeritakse ja pestakse (DMF), filtraadid ühendatakse ja orgaaniline lahusti eemaldatakse vaakumis aurutamisega.

Peptiid blokeeritakse (HF / anisool), lüofiliseeritakse, puhastatakse HPLC meetodil ja viiakse läbi MS. (M + H) +: leitud 547,8, arvest. 547,8.

Näide XIV. N-asendatud glütsiinühendite süntees: Ac- (Bzl) Gly- (Chx) Gly- (3-guanidopropüül) Gly-NH süntees2
N-asendatud glütsiinide sünteesimiseks kasutati Zuckermann et al. (J. Am. Chem. Soc. 114: 10646 (1992), viide) meetodit, 1 g SCAL-TG (0,29 mmol NH2/ g) (vt näide X) on seotud bromoäädikhappega sümmeetrilise anhüdriidi abil DCM / DMF-s. Iga kombinatsioonireaktsiooni korratakse kaks korda. Br-CH pigi2CO-SCAL-TG lisab Boc-NH-CH2CH2CH2NH2 DMSO-s ja loksutatakse vaik 2 tundi.

Pärast vabanemist korratakse protsessi, vaheldades Br-CH sidumist2COOH vaiguga ja bromoäädikhapet ja vastavat amiini sisaldava vaigu reaktsioon.

Vaik (Bzl) Gly- (Chx) Gly- (Boc-NH- (CH2)3) Gly-SCAL-TG atsetüüliti atseetanhüdriidi / DIEA / NMU-ga (1: 1: 0,25) DMF-s öö läbi. Pärast Boc-rühma vabanemist töödeldakse Ac- (Bzl) Gly- (Chx) Gly- (3-aminopropüül) Cly-SCAL-TG vaiku 1,8 M karboksüamidinopürasool-HCl-ga (Bernatowicz et al., J. Org. Chem. 57: 2497- 2502 (1992)) DIEA (1: 1) juuresolekul DMF-is 3 tundi toatemperatuuril.

Guanilatsiooni lõpp määrab Kaiseri jaotus. Saadud peptiidi lõhustamine ja töötlemine viiakse läbi nii, nagu on kirjeldatud näites X, ja MS viiakse läbi. (M + H) +: leitud 502,3, arvest. 502,3.

Näide XV. Diketopiperasiini ühendite süntees: tsüklo (Ser-Ida) -Ile-Arg-Leu-Ala-NH süntees2
Algne kaitstud tetrapeptiid, Fmoc-Ile-Arg (Pmc) -Leu-Ala-Rink, saadakse Fmoc strateegia abil koos Rink-vaiguga (vt näide I). Pärast Fmoc vabanemist on peptiidvaiguks Fmoc-Ida (OMe) -OH (3 ekv, DICK, HOBt) ja Fmoc-Ser (Bu) -OH (7 ekv; sümmeetriline anhüdriid) on ühendatud järjestikku. Ringi lõplik vabanemine ja spontaanne sulgemine viiakse läbi üheaegselt, hoides 50% piperidiini / DMF-i 1 tund. Pärast mitme etapi pesemist lõhustatakse ja vabastatakse lõplik peptiid TFA / tioanisooli / H segu abil.2O (95: 2,5: 2,5).

Saadud peptiidi töödeldakse ülalkirjeldatud viisil ja analüüsitakse meetodiga GHUR (> 95%) ja meetod MS. (M + H) +: leitud 655,4, arvest. 655,38.

Näide XVI. Ph-C süntees (NOCH2Ph) -CO-I-R-NH2
0,2 g Rinki vaiku on seotud Fmoc-Arg (Pmoc) -OH, Fmoc-Ile-OH-ga, millele järgneb Fmoc-kaitse eemaldamine (vt näide I).

Peptiidvaiguga Ile-Arg (Pmoc) -Rink seondub Ph-C-ga (NOCH2Ph) -COOH, kasutades ülalkirjeldatud DICK / HOBt. Peptiidvaik, Ph-C (NOCH2Ph) -CO-Ile-Arg (Pmc) -Rink töödeldakse nii, nagu on kirjeldatud näites I, ja MS viiakse läbi. (M + H) +: leitud 524,3, arvest. 524,6.

Näide XVII. Ac-pAph-Ile-Arg-Leu-Pro-NH süntees2
Süntees viiakse läbi 100 mg Rink'a vaiguga (0,48 mmol / g) vastavalt näites I kirjeldatud meetodile, kasutades järgmisi aminohappe derivaate: Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Arg (Pmc) -OH, Fmoc-Ile-OH ja Fmoc-pAph- (Fmoc) -OH (ratseemiline segu).

Peptiidi lõhustamine ja eraldamine viiakse läbi nii, nagu on kirjeldatud näites I. Mõlemad diastereomeersed peptiidid eraldatakse pöördfaasi kromatograafia-HPLC abil ja identifitseeritakse MS-meetodi abil. (M + H) +: leitud 754,4, arvest. 754,5.

Näide XVIII. Ac-Tyr-Chg-Arg-ol süntees
Peptiidjärjestus saadakse 0,25 g Fmoc-Arg (Pmc) -Sasriini vaiguga (0,5 mmol NH2/ g vaiku; Bachem Bioscience), kasutades näites I kirjeldatud meetodit. Pärast N-terminaalse Fmoc ja atsetüülimise vabanemist lõhustatakse kaitstud peptiid vaigust redutseeriva eemaldamisega C-terminaalse alkoholina (Mergler et al., Peptides, lk 177-178 (eds. Schneider ja Eberle; Leiden 1993), lisatud viitena). Peptiidvaiku loksutati NaBH lahusega4 (4 ekv.) 2 ml THF: EtOH (6: 1) 24 tundi. Pärast lõhustamisreaktsiooni pestakse vaiku DCM-ga, seejärel lõhustamislahusega ja pesuveed ühendatakse ja lüofiliseeritakse. Lüofiliseeritud peptiidi blokeeritakse töötlemisel TFA / vee / tioanisooliga (90: 5: 5) 2 tundi ja peptiidi analüüsitakse MS abil sadestamise teel, puhastatakse HPLC abil. (M + H) +: leitud 505,3, arvest. 505,3.

Näide XIX. Ac-Tyr-Chg-Arg-ol Acetate Synthesis
Kaitstud peptiidalkohol valmistatakse nii, nagu on kirjeldatud näites XVIII.

10 mg toorprodukti lahustatakse DCM / ACN-s ja töödeldakse äädikhappe anhüdriidiga (2 mmol) TEA (2,4 mmol) juuresolekul 20 minutit. Lahus filtreeritakse, aurustatakse ja peptiid vabastatakse eespool kirjeldatud viisil. Peptiid puhastati HPLC-ga ja analüüsiti MS-ga. (M + H) +: leitud 547,3, arvest. 547.3.

Näide XX. Ac-Phe süntees (pNH2) -Chg-Orn (C (NH) CH3) -Leu-Pro-NH2
1 g "TENTAGELi" NH2 vaik (0,28 mmol NH2/ g vaiku; Rapp Polymer; Tubingen Germany) on funktsionaliseeritud SCAL-linkeriga, nagu on kirjeldatud näites X, ja järgmised aminohapped on seotud: Fmoc-Pro-OH; Fmoc-Leu-OH; Fmoc-Orn- (Boc) -OH ja Fmoc-Chg-OH. Fmoc-Chg-Orn (Boc) -Leu-Pro-SCAL-TG peptiidvaiku töödeldakse 50% TFA-ga DCM-s (1 pesemine 1 minut, seejärel 1 pesemine 30 minutit), pestakse 3 korda DCM-ga, neutraliseeritakse 5% DIEA-ga DXM-is (2 x 30 s) ja 2 korda DHM-is. Peptiidvaigule lisatakse 1,5 g etüülimidi imidaatvesinikkloriidi (Aldrich) lahust 4 ml püridiini: DIEA segus ja 3 ml DMF-is ja seondumist jätkatakse öö läbi toatemperatuuril.

Peptiidvaigu, Fmoc-Chg-Orn (C (NH) -CH3) -Leu-Pro-SCAL-TG, vabastage 2% piperidiin DMF-s, 4 korda DCM ja seondub DIC / HoBt-ga DMF-s. Fmoc ja atsetüülimise vabanemine äädikhappe anhüdriidi: püridiiniga (1: 1) 20 minuti jooksul annab tulemuseks peptiidvaigu Ac-Phe- (pNH-BOC) -Chg-Orn- (С (NH) CH3) - Leu-Pro-SCAL-TG. SCAL linkeri ja peptiidi lõhustumise vähendamine, millele järgneb toorprodukti HPLC puhastamine, annab oodatava produkti. (M + H) +: leitud 740,2, arvest. 740,48.

Näide XXI. Ac-Phe süntees (pNH2) -Chg-Dap (N-C6H11N) -Leu-Pro-NH2
0,5 g SCAL-TG (0,32 mmol NH2/ g) on ​​seotud Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Dap (Boc) -OH ja Fmoc-Chg-OH-ga. Külgahelast pärit Boc-rühm eemaldatakse 50% TFA-ga 20 minuti jooksul ja peptiidvaigu neutraliseeritakse pesemisega 10% DIEA / DCM-ga. Külgahelas olev vaba aminorühm muudetakse dimetüülamidiumrühmaks, töödeldes peptiidvaiku 0,3 M PyBroP / NMI-ga DMF-is 20 minutit. Fmoc-rühma vabanemine 50% piperidiini / DMF-i seguga 60 min viib dimetüülamidiiniumrühma asendamiseni Dap-i külgahelas oleva piperidiiniumrühmaga. Järjestus lõpetatakse Fmoc-Phe (Boc) -OH-ga seondumise ja Fmoc-rühma vabastamisega. Peptiid atsetüülitakse ja lõhustatakse, nagu on kirjeldatud näites X.

Peptiid, puhastatud meetodiga GHUR, analüüsiti MS meetodil. (M + H) +: leitud 752,4, arvest. 752,4.

Näide XXII. Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -NH süntees2
Ratseemiline H-Phe (pCN) -OH sünteesitakse atsetamido-balonaadi abil (Wagner et al., GDR patent 155954). Ratseemiline Ac-pAph-OH sünteesitakse tsüanorühma transformeerimisega vastava metüültioimidaadi (tsüanorühma reaktsiooni vesiniksulfiidiga) ammonolüüsiga ja järgneva MeI metüülimisega.

1 g "TENTAGEL" vaiku (asendus = 0,21 mmol NH2/ g vaik) ja linker Knorr (Bernatowicz et al., Tetr. Lett. 30: 4645 (1989)) kasutatakse peptiidide sünteesiks.

Dipeptiid, Fmoc-Chg-Pal-Knorr-TG, valmistati nii, nagu on kirjeldatud näites I.

3-püridüülalaniini metüülitakse järjestikku 1 ml MeI-ga DCM-s üleöö. Pärast Fmoc vabanemist sidestatakse Ac-pAph-OH DIC / HOBt meetodiga ja peptiidi töödeldakse nii, nagu on kirjeldatud näites I. (M + H) +: leitud 550,3, arvest. 550,31.

Näide XXIII Ac-Tyr-Chg-pAph-Leu-Pro-NH süntees2
Ac-Tyr (But) -Chg-Phe- (pCN) -Leu-Pro-Knorr-TG pentapeptiidi komplekt viiakse läbi 0,4 g "TENTAGEL" -ga (asendus = 0,2 mmol NH2/ g vaik), nagu on kirjeldatud näites I. Vaiku töödeldakse öö läbi suletud süstlas 8 ml H-ga küllastunud püridiini / trietüülamiini (75:25) seguga.2S. Vaiguga seotud tioamiid metüülitakse, kasutades 0,5 g MeI-d 8 ml atsetoonis 30 minutit temperatuuril 50 ° C, seejärel pestakse atsetooni ja metanooliga.

Metüültioimiid pannakse reageerima ammooniumatsetaadiga metanoolis 3 tundi temperatuuril 55 ° C, et saada soovitud produkt, mis lõhustatakse vaigust ja puhastatakse, nagu eespool kirjeldatud. (M + H) +: leitud 761,4, arvest. 760,43.

Näide XXIV. Ac-Phe süntees (pCH2NH2) -Chg-Arg-Leu-Pro-NH2
Ac-DL-Phe (pCN) -Chg-Arg-Leu-Pro-NH2 (toorpeptiid) sünteesitakse ühe g Rinkvaiku (0,6 mmol NH kohta) kohta2/ g vaik), nagu on kirjeldatud näites I. 125 mg toores peptiid lahustatakse 50 ml MeOH-s ja lisatakse 0,5 ml Raney Ni suspensiooni (Aldrich). Peptiidi ja katalüsaatori segu hüdrogeenitakse rõhul 35 psi (241,3 kPa) 4 tundi toatemperatuuril. Katalüsaator filtreeritakse välja ja lahus aurustatakse kuivaks. Jääk lüofiliseeritakse 0,1% TFA vesilahusest, mis sisaldab 30% ACE-d.

Kuivatatud tehniline toode puhastatakse meetodiga GHUR ja analüüsitakse MS meetodil. (M + H) +: leitud 741,4, arvest. 741,7.

Näide XXV. Ac-Phe süntees (pC (NOH) NH2) -Chg-Arg-Leu-Pro-NH2
21,1 mg näites XXIV kirjeldatud viisil saadud tehnilist peptiidi segatakse 60,3 mg NH-ga2OH HCl (Aldrich) 1,5 ml MeOH-s, 0,7 ml püridiinis ja 0,5 ml tees. Segu segatakse 72 tundi toatemperatuuril ja seejärel lahusti ja lenduvad ained aurustatakse vaakumis. Peptiid puhastati HPLC-ga ja analüüsiti MS-ga. (M + H) +: leitud 770,4, arvest. 770.3.

Näide XXVI. Ühendite A1-A2-B süntees
A1-A2-B, s.o ühendid A1-A2- (A3)m-B, kus m = 0, saadakse joonisel fig. 3. Lühidalt, ratseemilise N-atsetüül-4-tsüanofenüülalaniini seondumine L-tsükloheksüülglütsiinmetüülestriga (H-Chg-OMe) annab tulemuseks kahe diastereomeerse dipeptiidi segu, mis eraldatakse kromatograafiaga. Ratseemiline n-atsetüül-4-tsüanofenüülalaniin lahustatakse soola valmistamisel osaliselt L-tsükloheksüülglütsiinmetüülestriga. Vähem lahustuv D, L-sool kristalliseerub kergesti ja järgnev kombinatsioon annab toor-Ac-F (pCN) -Chg-OMe, mida puhastatakse täiendavalt kromatograafiliselt silikageelil. Need dipeptiidestrid hüdrolüüsitakse vastavateks hapeteks, kasutades toatemperatuuril liitiumhüdroksiidi metanoolis / vees. Mõlemad dipeptiidhapped muundatakse vastavateks amiidideks sobivate amiinidega RNH2. Amiinid, mis ei ole turustatavad tooted, valmistatakse standardsete meetoditega.

Tsüanorühmade transformeerimine vastavateks amidiinideks viiakse läbi tavapäraste meetoditega kas tioamiidi ja metüültiosimidaadi kaudu või vastava amidoksiimi hüdrogeenimisega (näide XXV).

Viimane saadakse nitriili reaktsioonil hüdroksüülamiiniga. Allpool kirjeldatud näited illustreerivad nende ühendite valmistamist nende meetoditega. Leiutisekohaseid ühendeid võib saada teiste meetoditega; Näidetes valitud meetodeid kasutatakse mugavuse huvides.

Näide XXVII. Ac-pAph-Chg-NHCH süntees2-(4-metüülpüridiinium)
Ac-pAph-Chg-NHCH süntees2-(4-metüülpüridiinium) teostab Ac-F (pCN) -Chg-NH-CH konversiooni2-(4-püridüül) a, kasutades näites XXII kirjeldatud meetodeid. Lõppsaadus puhastatakse meetodiga GHUR, nagu on kirjeldatud näites I. MS analüüs: (M + H) +: leitud 493,3, arvutatud: 493,29.

Algne aine saadakse järgmiselt:
a) 2,32 g (10 mmol) Ac- (D, L) -F (pCN) lahustatakse 75 ml etanoolis kuumutamisega. Lisati L-tsükloheksüülglütsiinmetüülester (1,75 g, 10 mmol) ja segu segati 2 tundi toatemperatuuril. Sadestunud kristallid filtritakse ja kuivatatakse, saades 1,55 g D, L-soola. Filtraat aurustatakse osaliselt ja lahjendatakse eetriga.

Valitud kristallid kogutakse ja kuivatatakse, jättes 2,1 g L, L-soola, mis on saastunud D, L-soolaga. Toor-L, L-sool kombineeritakse 20 ml DMF-iga, 0,71 g HOBt-ga ja 1,18 g DCC-ga. Segu segatakse 24 tundi toatemperatuuril. Karbamiid filtreeritakse välja ja filtraat aurustatakse.

Jääk lahustatakse metüleenkloriidis ja lahust pestakse 1 N HCl ja küllastunud naatriumvesinikkarbonaadi vesilahusega. Orgaaniline kiht kuivatatakse ja aurustatakse, jääk kromatografeeritakse 60 g silikageelil, kasutades elueerimiseks 20% (v / v) atsetooni metüleenkloriidis. Ühendatud puhta fraktsiooni kristallimine metüleenkloriidist / eetrist / heksaanist annab 1,6 g Ac-F (pCN) -Chg-OMe-i värvitu kristallidena, sulamistemperatuuriga (mp) 178-180 ° C.

b) 1,93 g (5 mmol) Ac-F (pCN) -Chg-OMe segu (nagu ülaltoodud näites XXVII.a), 100 ml metanooli, 10 ml vett ja 0,75 g liitiumhüdroksiidi hüdraati segatakse lämmastiku atmosfääris. 24 tundi toatemperatuuril.

Lisatakse 2 ml äädikhapet, lahustid aurustatakse ja jääk jaotatakse metüleenkloriidi, mis sisaldab 20% isopropanooli, ja 1 N HCl vahel. Orgaaniline kiht kuivatatakse ja aurustatakse ning jääk kristallitakse metüleenkloriid / eetri / heksaani segust, et saada 1,6 g Ac-F (pCN) Chg-OH värvitu kristallidena, nii et pl. 216-218 ° C.

c) 150 mg (0,4 mmol) Ac-F- (pCN) -Chg-OH (vt eespool) segu, 65 mg (0,6 mmol) 4-aminometüülpüridiini, 124 mg (0,6 mmol) DCC, 60 mg (0,44 mmol) HOBt ja 5 ml DMF-i segatakse 20 tundi toatemperatuuril. Karbamiid eemaldatakse filtrimisega, filtraat aurustatakse. Jääk suspendeeritakse metanoolis ja lahustumatu produkt kogutakse, jättes 140 mg värvitu Ac-F- (pCN) -Chg-NHCH-d.2(4-püridüül) a.

Kromatograafia silikageelil, kasutades atsetooni: metüleenkloriidi / metanooli (4: 5: 1), andis analüütilise proovi. Kristallilise tahke aine mp. > 250 o C.

Näide XXVIII. Ac-F (4-amidiin) -Chg-NHCH2(4-metüülpüridiin)
See ühend saadakse 150 mg Ac-F (pCN) -Chg-NHCH reageerimisel2(4-püridüül) a (vt eespool) vesiniksulfiidiga, seejärel metüüljodiidi ja ammooniumatsetaadiga.

Produkt eraldatakse HPLC-ga homogeense ainena. MS andmed: (M + H) + leitud 493,3, arvest. 493,29.

Algne aine saadakse järgmiselt:
a) 2,8 g Ac-F (pCN), (L) -tsükloheksüülglütsiini metüülestri, 940 mg HOBt, 1,57 g DCC ja 30 ml DMF segu segatakse 2 päeva toatemperatuuril. Karbamiid eemaldatakse filtrimisega ja filtraat aurustatakse. Jääk lahustatakse metüleenkloriidis ja pestakse 1 N HCl ja 10% naatriumkarbonaadi vesilahuse lahusega. Orgaaniline faas kuivatatakse ja aurustatakse. Jäägi kristallimine metüleenkloriidist / eetrist / heksaanist andis 2,05 g värvitut Ac-F (pCN) -Chg-OMe, sulamistemp. 181-183 ° C.

b) 1,93 g Ac-F (pCN) -Chg-OMe (vt eespool) hüdrolüüsi 0,75 g liitiumhüdroksiidmonohüdraadiga 100 ml metanoolis ja 10 ml vees viiakse läbi nii, nagu on kirjeldatud L, L-isomeeri kohta Ülaltoodud näide XXVII, kristallimine metüleenkloriidist / eetrist annab 1,65 g Ac-F (pCN) -Chg-OH-d koos mp. 180-182 ° C.

c) 225 mg Ac-F (pCN) -Chg-OH (vt eespool), 100 mg 4-aminometüülpüridiini, 90 mg HOBt, 180 mg DCC ja 6 ml DMF segu segatakse nädalavahetusel toatemperatuuril. Karbamiid filtreeritakse välja ja filtraat aurustatakse, jääki segatakse metanooliga, tahke jääk eemaldatakse filtrimisega, samas kui 190 mg kristallilist Ac-F (pCN) -Chg-NHCH jäävad2(4-püridüül) ja nii pl. > 250 o C.

Näide XXIX. Ac-pAph-Chg-NHCH2CH2 (3-metüülpüridiin)
125 mg Ac-F (pCN) -Chg-NHCH segu2CH2(3-püridüül) a, 2 ml DMSO-d, 10 ml püridiini ja 3 ml trietüülamiini küllastati väävli vesinikuga, jahutades jääga / veega.

Pärast segamist suletud katseklaasis öö läbi toatemperatuuril aurustatakse lahustid, jääk lahustatakse atsetoon / eetris ja kuivatatakse, et saada 125 mg tioamiidi. See produkt kombineeritakse 2 ml DMSO-ga, 5 ml atsetooniga ja 0,75 ml metüüljodiidiga ning segu segatakse suletud katseklaasis öö läbi toatemperatuuril. Pärast lahjendamist tolueeniga aurustatakse lahustid ja jääki segatakse eetriga. Eeter dekanteeritakse, asendatakse värske eetriga ja segamist jätkatakse üleöö, kuni kummist aine tahkestub, seejärel filtreeritakse järelejäänud eeter ja jääk kuivatatakse.

Järelejäänud jääk lahustatakse 20 ml metanoolis ja töödeldakse 0,3 ml äädikhappega ja 0,4 g ammooniumatsetaadiga.

Segu kuumutatakse temperatuuril 55-60 ° C 2,5 tundi, seejärel lahusti aurustatakse.

Jääk lahustatakse vee / acn / TFA segus ja lüofiliseeritakse. Toorprodukt puhastatakse HPLC abil. MS andmed: (M + H) + leitud 507,3, arvest. 507,31.

Algne aine saadakse järgmiselt. 150 mg (0,4 mmol) Ac-F (pCN) -Chg-OH, 120 mg (0,6 mmol) 2- (3-püridüül) etüülamiinvesinikkloriidi, 125 mg DCC, 60 mg HOBt, 0,5 ml segu. diisopropüületüülamiini ja 10 ml DMF-i segatakse 24 tundi toatemperatuuril. Pärast lahusti aurustamist segatakse jääki metanooliga, lahustumatu produkt kogutakse filtrimisega ja pestakse metanooli ja eetriga, et saada värvituid kristalle. Filtraat aurustatakse ja jääk lahustatakse metüleenkloriid / isopropanoolis.

Seda lahust pestakse 10% naatriumkarbonaadi vesilahusega, kuivatatakse ja aurustatakse. Jääk kromatografeeritakse 14 g silikageelil, kasutades metüleenkloriidi: atsetooni: metanooli (5: 4: 1), et saada 40 mg Ac-F (pCN) -Chg-NHCH.2CH2(3-püridüül) a, st. 265-268 ° C.

b) 2- (3-püridüül) etüülamiindivesinikkloriid valmistatakse järgmiselt. 1,3 g 3-püridüülatsetonitriili, umbes 3 g Raney nikli ja 30 ml metanooli segu, mis sisaldas 10% mahust. ammoniaaki, hüdrogeenitud rõhul 35 psi (241,3 kPa) 20 tundi, kasutades Parri hüdrogeenijat. Katalüsaator filtreeritakse läbi tseliidi ja filtraat aurustatakse. Jääk lahustatakse metüleenkloriidis, kuivatatakse magneesiumsulfaadiga, filtreeritakse ja aurustatakse. Produkt muundatakse dihüdrokloriidiks, kasutades dioksaanis vesinikkloriidi. Kristallimine metanooli / eetri segust annab 1,4 g värvitu kristalle nii pl. 145-148 ° C.

Näide XXX. Ac-pAph-Chg-NHCH2CH2(4-metüülpüridiin)
See ühend saadakse ülalkirjeldatud meetoditega Ac-F (pCN) -Chg-NHCH interaktsiooni abil2CH2-(4-püridüül) a vesiniksulfiidiga, millele järgneb metüülimine metüüljodiidiga ja reaktsioon ammooniumatsetaadiga.

Toorprodukt puhastatakse HPLC abil. MS andmed: (M + H) + leitud 507,3, arvest. 507,31.

Lähtematerjal saadakse, sidudes Ac-F (pCN) -Chq-OH 2- (4-püridüül) etüülamiindivesinikkloriidiga, nagu on kirjeldatud näites XXIX.

2- (4-püridüül) etüülamiindivesinikkloriidi valmistatakse nagu on kirjeldatud 2- (3-püridüül) etüülamiindivesinikkloriidi puhul (vt eespool), hüdrogeenides püridüül-4-atsetonitriili Raney nikli kohal ammoniaagi manulusel. Divesinikkloriidsoolal on mp. 220 o C

Näide XXXI. Ac-pAph-Chg-NHCH2(4-amidinofenüül)
See ühend valmistatakse sarnaselt Ac-F (pCN) -Chg-NHCH jaoks kirjeldatud meetoditega2(4-tsüanofenüül) a, töödeldes vesiniksulfiidiga DMSO-s, püridiinis ja trietüülamiinis. Saadud bis-tioamiid metüülitakse metüüljodiidiga DMSO / atsetooni segus, seejärel reageeritakse ammooniumatsetaadiga, nagu eespool kirjeldatud. Toorprodukt puhastatakse HPLC abil. MS andmed: (M + H) + leitud 520,3, arvest. 520.3.

Algne aine saadakse järgmiselt. 75 mg (0,2 mmol) Ac-F (pCN) -Chg-OH segu, 50 mg (0,3 mmol) (4-tsüanofenüül) metüülamiinvesinikkloriidi, 62 mg DCC, 30 mg HOBt, 0,2 ml DIEA ja 2 ml DMF-i segatakse 24 tundi toatemperatuuril. Pärast filtrimist lahusti aurustatakse ja jääk lahustatakse metüleenkloriidis, mis sisaldab 20% isopropanooli. Lahust pestakse 1 N HCl ja 10% naatriumkarbonaadi vesilahusega, seejärel kuivatatakse ja lahusti aurustatakse.

Jääki segatakse väikeses koguses metanooli / veega, eraldatud tahke aine kuivatatakse, saades 80 mg Ac-F (pCN) -Chg-NHCH-d.2(4-tsüanofenüül) a.

(4-tsüanofenüül) metüülamiinvesinikkloriid valmistatakse järgmiselt. 2 g (10 mmol) -bromo-p-toluenitriili, 2 g (10,8 mmol) kaaliumftaalimiidi ja 30 ml DMF segu kuumutatakse tagasijooksul 1 minut.

Pärast jahutamist hapestatakse segu äädikhappega ja lahjendatakse veega, et toode kristalliseeruks. Kristallid filtreeritakse välja, pestakse veega ja kuivatatakse, saades 2,24 g värvitu N- (4-tsüanofenüül) metüülftaalimiidi, sulamistemperatuuriga 184 ° C. 182-184 ° C.

1,5 g N- (4-tsüanofenüül) metüülftaalimiidi suspendeeritakse 50 ml keevas metanoolis ja töödeldakse 1 ml hüdrasiinhüdraadiga. 5 minuti pärast saadakse selge lahus. Metanool aurustatakse ja jääki töödeldakse 2N HCl-ga. Suspensioon kuumutatakse keema ja seejärel jahutatakse jääl. Tahked ained filtritakse ja filtraat aurustatakse. Jääk lahustatakse vees. Saadud lahust kuumutatakse uuesti keema, jahutatakse ja filtreeritakse. Filtraat leelistatakse naatriumhüdroksiidi lisamisega ja ekstraheeritakse isopropanooli sisaldava metüleenkloriidiga. Orgaaniline faas kuivatatakse, lahusti aurustatakse ja jääk muundatakse vesinikkloriidiks, kristalliseeritakse isopropanooli / eetri segust, et saada 0,43 g värvitut kristallid mp. > 260 o C.

Hüdrokloriid (3-tsüanofenüül) metüülamiin saadakse (a-bromo-m-toluolnitriili reageerimisel kaaliumftaalimiidiga), saades N- (3-tsüanofenüül) metüülftalimiidi, st ° = 147-148 ° C. Selle ühendi reageerimine hüdrasiinhüdraadiga ja konversioon hüdrokloriidiks nagu eespool kirjeldatud, võimaldab saada 3-tsüanofenüülmetüülamiini TPL 223-226 ° C juures.

Näide XXXII. Ac-pAph-Chg-NHCH2(3-amidinofenüül)
See ühend valmistatakse eespool kirjeldatud meetodite abil. Ac-F (pCN) -Chg-NHCH2(3-tsüanofenüül) töödeldakse väävli vesinikuga DMSO-s, püridiinis ja trietüülamiinis. Saadud bis-tioamiid metüülitakse metüüljodiidiga DMSO / atsetooni segus, seejärel reageeritakse ammooniumatsetaadiga, nagu eespool kirjeldatud. Toorprodukt puhastatakse HPLC abil. MS andmed: (M + H) + leitud 520,3, arvest. 520.3.

Algne aine saadakse järgmiselt. 300 mg (0,8 mmol) Ac-F (pCN) -Chg-OH segu, 200 mg (1,2 mmol) (3-tsüanofenüül) metüülamiinvesinikkloriid, 250 mg DCC, 120 mg HOBt, 0,8 ml DIEA ja 10 ml DMF-i segatakse 24 tundi toatemperatuuril. Pärast filtrimist aurustatakse lahusti ja sade lahustatakse suure koguse metüleenkloriidis, mis sisaldab 20% isopropanooli.

Lahust pestakse 1 N HCl ja 10% naatriumkarbonaadi vesilahusega, kuivatatakse ja lahusti aurustatakse. Jääki segatakse isopropanooli / eetri seguga, eraldatud tahke aine eraldatakse, kuivatatakse ja saadakse 400 mg Ac-F (pCN) -Chg-NHCH.2(3-tsüanofenüül) a.

Näide XXXIII. Ac-pAph-Chg-NHCH (Me) (4-metüülpüridiinium)
Pealkirjas nimetatud ühendi diastereomeeride segu saadakse kahe diastereomeeri Ac-F (pCN) -Chg-NHCH (Me) (4-püridüül) ja vesiniksulfiidi, seejärel MeI ja ammooniumatsetaadi seguga.

Diastereomeerid jagavad HPLC-d. MS andmed: (M + H) + leitud 507,3, arvest. 507,31.

Lähtematerjal valmistatakse järgmiselt. 150 mg (0,4 mmol) Ac-F (pCN) -Chg-OH segu, 120 mg (0,6 mmol) ratseemilist 1- (4-püridüül) etüülamiinvesinikkloriidi, 125 mg DCC, 60 mg HOBt, 0,5 ml DIEA ja 10 ml DMF-i segatakse 24 tundi toatemperatuuril. Pärast filtrimist lahusti aurustatakse ja jääk lahustatakse suurtes kogustes metüleenkloriidi, mis sisaldab 20% isopropanooli.

Lahust pestakse 10% naatriumkarbonaadi vesilahusega, kuivatatakse ja aurustatakse. Jääki segati isopropanooli / eetri seguga, eraldati tahke aine ja kuivatati, saades 125 mg Ac-F (pCN) -Chg-NHCH (Me) (4-püridüül) a kahe diastereomeeri seguna.

Ratseemiline 1- (4-püridüül) etüülamiinvesinikkloriid valmistati järgmiselt.

1 g 4-atsetüülpüridiin-N-oksiidi, 2 g Raney nikli ja 30 ml metanooli, mis sisaldab 20% ammoniaaki (v / v), segu hüdrogeenitakse 24 tundi rõhul 30 psi (206,8 kPa).

Katalüsaator eemaldatakse filtrimisega läbi tseliidi ja filtraat aurustatakse.

Jääk lahustatakse metüleenkloriidis, lahus filtreeritakse ja aurustatakse.

Jääk lahustatakse isopropanoolis ja töödeldakse vesinikkloriidiga eetris. Sadestunud kristallid kogutakse kokku ja kuivatatakse, saades 0,9 g produkti, st. 198-200 o C.

Näide XXXIV. DIPA (m) pAph-Chg-Arg-Leu-Pro-NH süntees2
a) N, N-diisopropüülamiidi (p-tsüanbensüül) maloonhappe (DIPA (m) Phe (pCN)) - OH süntees
2- (p-tsüanbensüül) maloonhappe süntees viiakse läbi vastavalt modifitseeritud meetodile (vt Pinori jt USA patenti N 506191). 3,8 g 2,2-dimetüül-1,3-dioksaan-4,6-diooni (Meldrum'i happe; Aldrich) ja 1,12 g NaCNBH lahusele.3 (Aldrich) 25 ml DMF-s lisatakse 2,3 g p-tsüanbensaldehüüdi (Aldrich) ja segu segatakse 2 tundi toatemperatuuril. Reaktsioonisegule lisatakse 400 ml vett ja lahus jahutatakse jäävannis, pH reguleeritakse 3,8-4-ni, lisades tilkhaaval 20% HCl vesilahust. Valge sade kogutakse Buchneri klaaslehtrisse ja pestakse külma veega. Sade kuivatatakse vaakumis CaCl-ga2 24 tunni jooksul Need NMR tahked ained CDCI-s3 näitavad 2,2-dimetüül-5- (p-tsüan) bensüül-l, 3-dioksaan-4,6-diooni (DCCD) olemasolu, sulamistemperatuuriga 21 ° C; 135-142 ° C ja Rt 0,45 (CHCl3 : MeOH: äädikhape; 95: 4: 1).

1,5 ml diisopropüülamiinile 45 ml DCM-s lisatakse 3 ml N, O-Bis (trimetüülsilüül) atseetamiidi (BSA) ja kuumutage lahust tagasijooksul magnetsegajaga varustatud reaktsioonikolbi ja kondensaatoriga, mis sisaldab CaCl-ga katseklaasi.2, 7 tunni jooksul Pärast lahuse jahutamist toatemperatuurini lisatakse 0,8 g DBPD-d ja reaktsioonisegu kuumutatakse tagasijooksul 3 tundi (kuni muutus soovitud produktiks, mis on näidatud TLC abil). Pärast reaktsioonisegu jahutamist lisatakse ettevaatlikult 5-8 ml 20% vesinikkloriidhappe vesilahust. Pärast kihtide eraldamist pestakse orgaanilist kihti veega, kuivatatakse (MgS04)4) ja aurustatakse kuivaks, et saada puhas produkt, mida kasutatakse järgmises etapis ilma täiendava puhastamiseta.

Ühendid identifitseeritakse NMR abil CDCl-s3 ja MC.

b) DIPA (m) pAph-Chg-Arg-Leu-Pro-NH süntees2
Peptiidvaigu DIPA (m) Phe (pCN) -Chg-Arg (PMc) -Leu-Pro-Rink sünteesitakse näites I kirjeldatud meetodil. Saadud vaiku töödeldakse hüdroksüülamiinvesinikkloriidiga, nagu on kirjeldatud näites I. Saadud vaiku töödeldakse hüdroksüülamiinvesinikkloriidiga, kirjeldatud näites XXV, et saada DIPA (m) Phe (pC (NOH) NH2) -Chg-Arg (PMC) -Leu-Pro-Rink. Pärast peptiidi vaigust lõhustamist ja lüofiliseerimist lahustatakse toorprodukt (120 mg) 80 ml MeOH-s ja 10 ml MH küllastunud lahuses.3 MeOH-s. Reaktsioonisegule lisatakse 0,25 ml Raney nikli suspensiooni (Aldrich) ja segu hüdrogeenitakse 24 tundi rõhul 45 psi (310,2 kPa). Katalüsaator filtreeritakse välja, lahusti aurutatakse kuivaks ja jääk lüofiliseeritakse 0,1% TFA ja ACN 1: 1 vesilahusest. Toorpeptiid puhastatakse meetodiga GHUR ja identifitseeritakse ühendus MS. (M + H) + leitud 824,2, arvest. 824,5.

Näide XXXV
Paljude asendajatega ühendid on osutunud Xa faktori efektiivseteks inhibiitoriteks:
Ühendus - arvutatud. (Leitud)
Ac- (2-CF3Bzl) -Y-I-R-L-P-NH2 - 860,5 (860,3)
Ac- (CH3CH2CH2CH (CH3) CH2) -Y-I-r-L-P-NH2 - 786,5 (786,5)
CH3OCO-Y-I-R-L-P-NH2 - 742,4 (742,4)
Ac-Y-Chg-R-NH2 - 518,2 (518,2)
Nal (2) -Cha-R-D (O-allüül) -NH2 - 679,4 (679,4)
y-Tle-R-Nle-P-NH2 - 660,4 (660,4)
Phe (pF) -I-R-L-P-NH - 662,3 (662,3)
Ac- (D) Tic (OH) -I-R-L-P-NH2 - 714,4 (714,4)
Ac-Phe (pCN) -I-R-L-P-NH2 - 711,4 (711,4)
Ac-Phe (pCONH2A) -Chg-r-L-P-NH2 - 755,4 (755,4)
y-chg-r-nh2 - 476,2 (476,2)
Ac-W-Chg-R-L-P-NH2 - 751,3 (751,3)
Ac-Y-I-R-NH-CH (CH3) - (CH2)2-CH3 - 562,3 (562,3)
Ac-Y-Pgl-R-L-P-NH2 - 722,2 (722,2)
Ac-Y-Chg-R-Ina-NH2 - 629,4 (629,4)
Ac-Tza-Chg-R-NH2 - 509,3 (509,3)
Ac-Y-Chg-R-Pip-NH2 - 629,4 (629,4)
Ac-Phe (pNH2) -Chg-R-NH2 - 517,2 (517,2)
Ac- (Bzl) G- (Chx) Gly- (3-guanidinopropüül) G-NH2 - 502,3 (502,3)
Ac-Y-Chg-R-ol.atsetaat - 547,3 (547,3)
Ac-Y-Chg-R-OCH3 - 533,3 (533,3)
Ac-Y-Chg-R-OH - 519,3 (519,3)
Bz-Y-Chg-R-NH2 - 532,2 (532,2)
Näide XXXVI. Keemiliste muutuste kombinatsioonid, mis parandavad aktiivsust, kui üksikud muutused ei pruugi aktiivsust parandada.

Mõõdetakse inhibiitorfaktori Xa aktiivsust. Leiutise peptiidi aktiivsuse näitajana võib siiski mõõta mis tahes asjakohast bioloogilise aktiivsuse mõõtmist, nagu leiutise peptiidi YIR mõju koagulatsiooniprotsessile, in vivo aktiivsusele, in vivo poolväärtusaegale, suukaudsele biosaadavusele, suukaudsele kättesaadavusele või poolväärtusaegale.

Kirjeldatakse paljusid spetsiifilisi muudatusi. Näiteks viiakse läbi kaks muudatust, et näidata, et aktiivsuse edasine suurenemine saavutatakse muudatuste kombinatsiooniga, isegi kui üksikud muudatused aktiivsust veidi suurendavad.

Üksikute keemiliste muutuste tulemusel saadakse Ac-Y-I-R-L-P Ki = 0,49 uM ja (iBu) Y-I-R-L-P Ki = 2,6 uM võrreldes algühendiga Y-I-R-L-P (Ki = 5,3 uM). Nende kahe muudatuse kombinatsioon annab Ac- (iBu) Y-l-R-L-P-NH2 Ki = 0,04 μM. Seega näitavad need tulemused, et leiutisekohane peptiid, millel on kahe keemilise muutuse kombinatsioon, võib oluliselt suurendada inhibeerivat aktiivsust Xa faktoriga võrreldes vastavate analoogidega üksikute muutustega isegi siis, kui üks lähteühend, nagu (iBu) Y-I-R-L-P-NH2 ei ole oluliselt suurenenud aktiivsus võrreldes algühendiga Y-I-R-L-P-NH2.

Tabelis 3 on toodud näited spetsiifilistest keemilistest modifikatsioonidest, mis annavad ühenditele Ki väärtused vahemikus 100 µM kuni 1 pM teguri Xa inhibeerimise suhtes.

Näide XXXVII. Valitud puhastatud ensüümide ja teiste seriinproteaaside in vitro inhibeerimine.

Leiutisekohase ühendi võimet inhibeerida faktorit Xa, trombiini, plasmiini, elastaasi ja trüpsiini hinnatakse YIR peptiidi kontsentratsiooni määramisel, mis viib ensüümi aktiivsuse inhibeerimisele 50% võrra (IR50). Puhastatud ensüüme kasutatakse kromogeensetes meetodites. Inhibeerimise konstantsuse määramiseks reguleerige IR-väärtust.50 substraadiga võrdlemiseks, kasutades järgmist valemit:
Ki = IR50 (1 /<1 + ((концентрация субстрата))/Km substraat)>) (Chen ja Prusoff, Biochem. Pharmacol. 22: 3099-3018 (1973)).

a Kogemus Xa teguriga
Selle meetodi jaoks on TBS-P puhver (50 mM Tris-Cl, pH 7,8, 200 mM NaCl, 0,05% (mass / maht) NaN)3). IR50 määratakse 25 μl inimese faktor Xa (Enzyme Research Laboratories, Inc. South Bend, IN) kombineerimisel TBS-P-s Costari mikrotiiterplaadi sobivates süvendites; 40 μl 10% (v / v) DMSO-d TBS-P-s (inhibeerimata kontrollproovid või testpeptiidi erinevad kontsentratsioonid lahjendatud 10% (v / v) DMSO-s TBS-P-s ja substraat S-2765 (Na-bensüüloksükarbonüül) -D-Arg-Cly-L-Arg-p-nitroanimiid), Kabi Pharmacia, Inc., Franklin, OH) TBS-P-s.

Määramine viiakse läbi peptiidi inhibiitori ja ensüümi eelkultiveerimisega 10 minutiks, seejärel alustatakse katse substraadi lisamisega, et saada lõppmaht 100 µl. Kromogeense substraadi esialgne hüdrolüüsikiirus määratakse absorptsiooni muutusega 405 nl juures, kasutades Bio-tek Instruments kineetilise plaadi lugejat (Ceres UV900HDi) 25 o C juures aja pikkuse lineaarses osas (tavaliselt 1-5 minutit pärast substraadi lisamist). Inhibiitori kontsentratsioon, mis põhjustab substraadi hüdrolüüsi kiiruse 50% vähenemise, määratakse lineaarse regressiooniga pärast hüdrolüüsi suhteliste kiiruste sõltuvuse (võrreldes mitte-inhibeeritud kontrollproovidega) sõltuvust peptiidi kontsentratsioonist. Ensüümi kontsentratsioon on 0,5 nM ja substraadi kontsentratsioon on 140 µM.

b) Trombiini kasutamise kogemus
Selle meetodi puhul kasutatakse TBS-P puhvrit. IR50 määratud nii, nagu on kirjeldatud näites XXXVII. a, välja arvatud see, et substraat on S-2366 (L-PyroGlu-L-Pro-L-Arg-p-nitroanimid; Kabi) ja ensüüm on inimese trombiin (Enzyme Research Laboratories, Inc; South Bend.IN). Ensüümi kontsentratsioon on 1 nM ja substraadi kontsentratsioon on 175 µM.

c) Kogemused plasmiiniga
Selle meetodi puhul kasutatakse TBS-P puhvrit. IR50 määratud näites XXXVII. a, kuid substraadina kasutatakse S-2251 ((D) -Val-L-Leu-L-Lу-p-nitroanimiidi; Kabi) ja ensüümina kasutatakse inimese plasmiini (Kabi). Ensüümi kontsentratsioon on 5 nM ja substraadi kontsentratsioon on 300 uM.

d) Kogemused trüpsiiniga
Selle katse jaoks kasutage TBS-P, mis sisaldab 10 mM CaCl2. IR50 määratud nii, nagu on kirjeldatud näites XXXVII a, kuid substraat on BAPNA (bensoüül-L-Arg-p-nitroanimiid; Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo ja ensüüm on veise pankrease trüpsiin (tüüp XIII, töödeldud TRSC; Sigma); Ensüümi kontsentratsioon on 50 nM ja substraadi kontsentratsioon on 300 µM.

d) Elastaasi kasutamise kogemus
Selle katse jaoks kasutatakse Tris-Cl pH 7,4, 300 mM, 300 mM NaCl, 2% (v / v) N-metüülpürrolidooni, 0,01% (mass / maht) NaN.3.

IR50 määratud nii, nagu on kirjeldatud näites XXXVII.a, kuid substraat on suktsinüül-Ala-Ala-p-nitroanimiid (Calbiochem-Nova Biochem Corp., San Diego CA) ja ensüüm on inimese neutrofiil elastaas (Ateena GA). Ensüümi kontsentratsioon on 75 nM, substraadi kontsentratsioon on 600 µm.

Testitavate ühendite Ki väärtus võrreldes TENSTOP kontrollühendiga (N-alfa-tosüül-Cly-p-amidinofenüülalaniini metüüleeter; American Diagnostica, Inc., Greenwich CT), mis on Xa faktori pöörduv inhibiitor (Sturzebecher et al., Res. 54: 245-252 (1989), Hauptmann et al., Thromb Haerm. 63: 220-223 (1990)) on toodud tabelis 2. Andmed näitavad, et leiutise YIR-peptiidid võivad inhibeerida Xa faktori aktiivsust, kuid praktiliselt ei inhibeeri teiste seriinproteaaside, sealhulgas trombiini ja plasmiini aktiivsust, mis osalevad vere hüübimise ja fibrinolüüsi protsessis.

Näide XXXVIII. Kogemused hüübimise inhibeerimise määramisel.

Leiutisekohaseid ühendeid hinnatakse nende võime suhtes inhibeerida faktor Xa aktiivsust. Erinevate ühendite efektiivsust hinnatakse protrombiiniaja (PT) abil in vitro, kasutades grupi doonori plasmat.

Kasutatakse ka ex vivo kogemust, milles plasm kogutakse erinevatel aegadel pärast ühendi intravenoosset manustamist rottidele või küülikutele või intraduodenaalsele manustamisele rottidele ja kasutades PV määratlust, määratakse plasma plasma poolestusaeg, PV määramine käivitatakse tromboplastiini lahjendamise teel, et saada tromboplastiini, et saada tromboplastiin. kergesti reprodutseeritav hüübimisnäitaja, mida nimetatakse lahjendus PA määramiseks, nagu allpool kirjeldatud. Erinevate ühendite efektiivsus määratakse ka rottidel in vivo šunttrombi mudeli abil.

a) Lahjendatud protrombiini määramine in vitro
Fibromeetri tassi lisatakse 10 μl sooja (37 ° C) trombotsüütide vaeset rühma inimvereplasma (BTP). (Baxter Diagnostics, Inc; McGaw Park Il).

Lisage 50 μl uuritavat ühendit mitmesugustes kontsentratsioonides TBS-BSA-s kaltsiumi (50 mM Tris-Cl, 100 mM NaCl, 0,1% (mass / maht) veise seerumi albumiiniga, 20 mM CaCl-ga).2). Kontrollkatsetes lisati TBS-BSA koos kaltsiumiga, kuid ilma testitava ühendita, et mõõta inhibeerimata koagulatsiooni aega.

Fibromeetri tassile lisatakse 150 μl lahjendatud soojendatud küüliku tromboplastiini ja käivitatakse fibromeetri taimer. Enne ühendi testimist saadakse küüliku tromboplastiini lahjenduskõver ja seda kasutatakse tromboplastiini lahjendusastme valimiseks, mis annab inhibeerimata kontrollproovide jaoks PV umbes 30 sekundit. Testikontsentratsioon tagab koagulatsiooni 50% inhibeerimise (IR)50) testitav ühend (vt tabel 4) arvutatakse lahjenduskõvera ajaparameetrite põhjal.

Teise võimalusena määratakse lahjendatud protrombiiniaeg kasutades "uurimismeetodit" automaatse instrumendi ACL3000 plus, Instrumentation Laboratories (IL; Milano, Itaalia) abil. Tromboplastiini lahjendatakse kuni hüübimisaja saavutamiseni 30-35 s. See hüübimisaeg on 100%. Ehitada lahjendatud tromboplastiini 2-kordse lahjendusega standardne kalibreerimiskõver. (Küüliku aju tromboplastiin IL-rühm). Katse ajal segati 50 μl proovi (tsentrifuugimisega eraldatud plasma) 100 μl tromboplastiini ja nefelomeetrilisi näitajaid võeti pärast 169 s. Koagulatsiooni aeg määratakse valguse hajumise maksimaalse muutuse kiiruse põhjal, mis arvutatakse mõõtevahendi abil.

Inhibeerimine väljendatakse aktiivsuse protsendina, mis on määratud võrdlemisel kalibreerimiskõveraga.

b) lahjendatud protrombiini aja ex vivo määramine
Testitavat ühendit manustatakse intravenoosselt või sabaveeni (rott) või kõrva veeni (küülik) kaudu vastavalt heakskiidetud meetodile.

1 ml vereproovid võetakse mõõdetud intervallidega pärast testitava ühendi manustamist kanüülitud unearteri (rott) või kõrvaarteri (küülik) poolt. Pärast tsentrifuugimist, et saada BTP, paigutatakse plasma viivitamatult jääle säilitamiseks või külmutamiseks.

Lahjendatud protrombiini aja määramiseks kuumutatakse ja analüüsitakse plasma nagu eespool kirjeldatud.

Inhibeerimise protsent arvutatakse tromboplastiini lahjenduskõvera põhjal, mis konstrueeriti iga proovide seeria jaoks ja mida kasutati aja määramiseks, millal ligikaudu 50% algsest antikoagulandi aktiivsusest jääb plasmas (T 1/2). Selle katse tulemused näitavad, et leiutisekohased YIR-peptiidid võivad inhibeerida vere hüübimist in vitro ja pärast in vivo manustamist (vt tabel 4).

Erinevaid ühendeid testitakse ka antikoagulantide aktiivsuse suhtes, kasutades lahjendatud protrombiini aja ex vivo määramist, kasutades erinevaid annuseid intravenoosselt boolusena.

Kõigil tabelis 5 loetletud ühenditel on vähemalt 30% inhibeerimine 10 minutit pärast manustamist - C3H7N) -L-P-NH2
30. Ac-F (pNH2A) -Chg-r-L-P-NH2
31. Ac-Nal (2) -Chg-R-L-P-NH2
32. Ac-pAph-Chg-Dab (Ny-C3H7N)
33. Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2
34. Ac-pAph-Chg-PaiMe (3) -L-P-NH2
35. Ac-pAph-Chg-R-NH2
36. Ac-pAph-Chg-R-OH
37. Ac-pAph-Chg-R-NH-Nip-NH2
38. Ac-K-Nal (2) -Chg-R-Hyp-E-NH2
39. DIPA-pAph-Chg-R-L-P-NH2
40. DIPA-mF (pNH2A) -Chg-r-L-P-NH2
41. Isn-F (pNH2) -Chg-R-L-NH2
42. Pza-F (pNH2A) -Chg-r-L-P-NH2
43. Tfa- (iBu) F (pNH2A) -Chg-r-L-P-NH2
44. Tfa- (iBu) Y-Chg-R-L-P-NH2
45. Tfa- (iBu) Y-I-Orn (N-C3H7N) -L-P-NH2
Mõnedes katsetes manustati testühendeid rottidele intraduodenaalselt. Isased Spraque-Dawley rotid tuimastatakse subkutaanselt ketamiini / ksülasiiniga. Õige unearter on kanüülitud vereproovide võtmiseks. Laparotoomia ja kaksteistsõrmiksoole kanüülimine viiakse läbi nõelaga, millel on sfääriline ots, ja surutakse alla, et tagada õmbluse perifeerset asukohta sisestuskoha suhtes. Täiendav venitus asetatakse proksimaalselt sisseviimise punktini, et vältida mao sisu lekkimist. Õmbluse efektiivsust, et vältida ühendi sisenemiskohale jõudmist, testitakse iga katse lõpus survet kasutades.

Süstimiskoht asub kaksteistsõrmiksoole-mao ristmikust umbes 4 cm kaugusel. Ühendeid manustatakse 1 ml soolalahuses. Enne testitava ühendi manustamist ja 15, 30, 60, 90 ja 120 minutit pärast manustamist võetakse 0,7 ml vereproov. Plasma eraldatakse tsentrifuugimisega ja analüüsitakse hüübimise inhibeerimiseks lahjendatud protrombiini aja meetodil.

Järgnevates ühendites on lahjendatud protrombiini aja määramisel vähemalt 30% inhibeerimine, millele järgneb ühendi 50 mg / kg intraduodenaalne manustamine: Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -NH-CHz-Chx; Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -NH-Chx; Bzf-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2; Ac-F (pNH2A) -Chg-r-L-P-NH2; Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -L-P-NH2; Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2; Ac-Aph-Chg-AMP (4); Tsüklopentüül-CO-pAph-Chg-PaIMe (3) -NH2; 3-Icc-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2; 2-furoüül-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2; 5-Me-tienüül-CO-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2, Ac-Y (3-I) -Chg-R-L-P-NH2, Ac-F (pNH2) -Chg-R-ol ja Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -ool.

c) Tromboosi arteriovenoosse anastomoosi mudel rottidel
Leiutise erinevate ühendite antitrombootilist efektiivsust hinnatakse ekstrakorporaalse arteriovenoosse (AV) manööverdamise abil.

AV manööverdamise kontuur (anastomoos) koosneb 20 cm pikkusest polüetüleenist torust (PE) 60, mis on sisestatud paremasse unearterisse, 6 cm pikkune PE160-st valmistatud toru, mis sisaldab 6,5 cm pikkust merseriseeritud puuvilla lõnga (5 cm pikkune segment külgneb vooluga veri) ja teise 20 cm pikkuse PE60 katseklaasi, mis lõpetab kontuuri vasakpoolses jugulaarses veenis.

Enne ühendite sisseviimist täidetakse kogu ahel soolalahusega.

Testühendeid manustatakse pideva infusiooni teel sabaveeni, kasutades kolbpumpa ja kateetrit (infusiooni maht 1,02 ml / tund). Ühendit manustatakse 30 minutit, seejärel avatakse šunt ja verel lastakse voolata 15 minutit (kokku 45 minutit infusiooni). 15-minutilise perioodi lõpus kinnitatakse šunt, niit eemaldatakse ettevaatlikult ja kaalutakse analüütilise kaaluga.

Trombi moodustumise inhibeerimise protsent määratakse kontrollrottides moodustunud trombi massi järgi, mida infundeeriti soolalahusega.

Järgmised ühendid inhibeerivad trombide kasvu vähemalt 30% pärast 33 ug / kg / min infusiooni: Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -NH-CH2-Chx; Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -NH-Chx; Bzf-pAph-Chg-PaIMe (3) -NH2; Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -L-P-NH2; Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2; Ac-pAph-Chg-AMP (4); Tsüklopentüül-CO-pAph-Chg-PaIMe (3) -NH2; 3-Icc-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2; 2-furoüül-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2; 5-Me-tienüül-CO-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2, Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -ol ja Tos-F (pNH2A) -Chg-r-L-P-NH2.

Kuigi leiutist on kirjeldatud erinevate valikute kirjeldusega, on eriala asjatundjatele selge, et üksikasjalikud konkreetsed näited illustreerivad leiutist ainult. Tuleb meeles pidada, et ilma leiutise ulatusest kõrvale kaldumata võib teha mitmeid muudatusi.

Seega on leiutis piiratud ainult järgmiste nõudluspunktidega.

1. Mitteloodusliku ühendiga, mis inhibeerib spetsiifiliselt üldvalemiga Xa faktori aktiivsust
A1-A2- (A3)m-B,
kus m = 0 või 1;
A1 - R1-R2-R3;
A2 - R4-R5-R6;
A3 - R7-R8-R9;
R1 valitud rühmast, kuhu kuuluvad

kus X on N ja R '1 ja R "1 sõltumatult valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, alküül-, atsüül-, arüül-, arüülalküül- ja amino-kaitserühmad,
R2 - CR99R100, kus r99 ja R100, sõltumatult valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, alküül, arüülalküül, heteroarüülalküül ja heteroarüül;
R3 - -C (O) - või -CH2-;
R4 - -NR50-, kus r50 tähendab H;
R5 - CR201R202, kus r201 ja R202 sõltumatult valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, alküül, arüül ja arüülalküül;
R6 - -C (O) või -CH2-;
R7 - -NR51, kus r51 - H;
R6 - -CR210, R211-, kus r210, R211, sõltumatult valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, alküül, arüülalküül ja heterotsükkel ning alküül, alküülarüül ja heterotsükkel võivad olla asendatud Q või - (CH2)n-Q, kus n = 1-5 ja Q on valitud rühmast, kuhu kuuluvad amiin-, amidiin-, imidasool- ja guanidiinrühmad, mis võivad olla asendatud, ja mono-, di-, tri- või tetraalküülammoonium farmatseutiliselt vastuvõetavad soolad, selle isoureid või isotogureid;
R9 - -C (O) - või -CH2-;
B - -NHR52, kus r52valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, alküül, arüülalküül, heteroarüülalküül, heteroarüül, üks aminohape või kaks aminohapet,
või selle farmatseutiliselt vastuvõetav sool, amiid, ester, alkohol või aldehüüd.

2. Ühend vastavalt nõudluspunktile 1, mida iseloomustab see, et m = 1.

3. Ühend vastavalt nõudluspunktile 1, mida iseloomustab see, et m = 0.

4. Ühend vastavalt nõudluspunktile 2, mida iseloomustab see, et B-NHR52, kus r52 on valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, alküül, arüülalküül, heteroarüülalküül, heteroarüül, üks või kaks aminohapet.

5. Ühend vastavalt nõudluspunktile 3, milles R52 on valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, alküül ja heteroarüül.

6. Ühend vastavalt nõudluspunktile 4 või 5, mida iseloomustab see, et R '1 on valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, alküül-, atsüül-, arüül-, arüülalküül- ja amino-kaitserühmad.

7. Ühend vastavalt nõudluspunktile 6, mida iseloomustab see, et R '1 - H.

8. Ühend vastavalt nõudluspunktile 6, mida iseloomustab see, et R '1 - alküül.

9. Ühend vastavalt nõudluspunktile 6, mida iseloomustab see, et R '1 - atsüül

10. Ühend vastavalt nõudluspunktile 6, mida iseloomustab see, et R '1 - arüül.

11. Ühend vastavalt nõudluspunktile 6, mida iseloomustab see, et R '1 - arüülalküül.

12. Ühend vastavalt nõudluspunktile 6, mida iseloomustab see, et R '1 - rühm, mis kaitseb aminorühma.

13. Ühend vastavalt nõudluspunktile 6, milles R99 valitud rühmast, kuhu kuuluvad H, alküül, arüülalküül, heteroarüülalküül ja heteroarüül.

14. Ühend vastavalt nõudluspunktile 8, milles R100 - arüülalküül.

15. Ühend vastavalt nõudluspunktile 8, milles R100 - heteroarüülalküül.

16. Ühend vastavalt nõudluspunktile 6, milles R201 - H või alküül.

17. Ühend vastavalt nõudluspunktile 9, mida iseloomustab see, et R202 - alküül.

18. Ühend vastavalt nõudluspunktile 6, mida iseloomustab see, et R210 - H või arüülalküül.

19. Ühend vastavalt nõudluspunktile 10, milles R211 - H.

20. Ühend vastavalt nõudluspunktile 10, milles R211 - arüülalküül.

21. Ühend vastavalt nõudluspunktile 10, milles R211 - heterotsükkel

22. Mitteloodusliku päritoluga ühend, mis on valitud grupist
Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -NH-CH2-Chx;
Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -NH-2CMT;
Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -NH-Chx;
Ac-F (pNH2) -Chg-Dab (N-C3NH7) -L-P-NH2(SEQ ID NO: 263);
Bz-F (pNH2A) -Chg-r-L-P-NH2(SEQ ID NO: 264);
Tos-F (pNH2A) -Chg-r-L-P-NH2(SEQ ID NO: 265);
Ac-Y (3 - 1) -Chg-R-L-P-NH2(SEQ ID NO: 266);
y-Chg-R-L-NH2;
Ac-F (pNH2) -Chg-R-ol;
Tsüklopentüül-CO-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2;
3-Igc-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2;
Bzf-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2;
3-Igc-F (pNH2A) -Chg-r-L-P-NH2;
Ac-F (pNH2) -Chg-R-NH-2-tiasolüül;
2-furoüül-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2;
5-Me-2-tienüül-CO-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2;
Ac-Nal (2) -Chg-R-NH-2-tiasolüül;
2-Bzf-F (pNH2A) -Chg-r-L-P-NH2;
Ac-pAph-Chg-Dab (N-C3H7N) -L-P-NH2(SEQ ID NO: 268);
Ac- (iBu) pAph-Chg-R-L-P-NH2(SEQ ID NO: 271);
Ac-pAph-Chg-R-Gla-P-NH2(SEQ ID NO: 272);
Ac-pAph-Chg-R-Pen (CH2COOH) -P-NH2(SEQ ID NO: 273);
Ac-pAph-Chg-R-L-P-NH2(SEQ ID NO: 274);
Ac-F (pNH2A) -Chg-R- (Me) L-P-NH2(SEQ ID NO: 275);
Ac-F (pNH2) -Chg-R-OEt;
Ac-F (pNH2) -Chg-Orn (N-C3H7N) -L-P-NH2(SEQ ID NO: 276);
Ac-F (pNH2A) -Chg-r-L-P-NH2(SEQ ID NO: 277);
Ac-Nal (2) -Chg-R-L-P-NH2(SEQ ID NO: 278);
Ac-pAph-Chg-Dab (N-C3H7N) -NH2;
Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2;
Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -L-P-NH2(SEQ ID NO: 279);
Ac-pAph-Chg-R-NH2;
Ac-pAph-Chg-R-OH;
Ac-pAph-Chg-R-ol;
DIPA- (m) pAph-Chg-R-L-P-NH2(SEQ ID NO: 36);
DIPA- (m) F (pNH2A) -Chg-r-L-P-NH2(SEQ ID NO: 289);
Isn-F (pNH2A) -Chg-r-L-P-NH2(SEQ ID NO: 282);
Pza-F (pNH2A) -Chg-r-L-P-NH2(SEQ ID NO: 283);
Tfa- (iBu) Y-Chg-R-L-P-NH2(SEQ ID NO: 285);
Tfa- (iBu) Y-1-Orn (N-C3H7N) -L-P-NH2(SEQ ID NO: 286);
CF3C (O) - (iBu) Phe (NH2) -Chg-Arg-Leu-Pro-NH2;
Ac-pAph-Ile-Arg-Leu-Pro-NH2;
CF3C (O) - (iBu) Nal (2) -Chg-Arg-Leu-Pro-NH2;
Ac-Phe- (31,4NH2) -Chg-Arg-Leu-Pro-NH2;
CF3C (O) -Tir-Chg-Arg-Leu-Pro-NH2;
(5-blnimidasool) -Phe (NH2) -Chg-Arg-Leu-Pro-NH2;
CF3C (O) - (iBu) Tyr-Ile-Arg-Leu-Pro-NH2;
AC- (Chx-CH2) Tyr-Ile-Arg-Leu-Pro-NH2;
D-Tyr-Chg-Arg-Leu-Pro-NH2;
Ac-Trp-Chg-Arg-Leu-Pro-NH2;
23. Mitteloodusliku päritoluga ühend, mis on valitud rühmast, sealhulgas
Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -NH-CH2-Chx;
Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2;
Brf-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2;
Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -L-P-NH2(SEQ ID NO: 279);
Ac-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2;
Tsüklopentüül-CO-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2;
3-Igc-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2;
2-furoüül-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2;
5-Me-tienüül-CO-pAph-Chg-PalMe (3) -NH2; ja
Ac-pAph-Chg-PalMe (4) -ool.

24. Mittelooduslik ühend, mis on valitud rühmast, kuhu kuuluvad AC-pAph-Chg-AMP (4) ja AC-pAph-Chg-AEMP (4).

25. Mitteloodusliku päritoluga ühend, mis on valitud grupist
Ac-Tyr-Ile-Arg-Leu-Ala-NH2(SEQ ID NO: 2);
Ac-Tyr-Ile-Arg-Leu-NH2(SEQ ID NO: 3);
Ac- (iBu) Tyr-Ile-Arg-Leu-Pro-NH2(SEQ ID NO: 4);
Ac-Tyr-Ile-Arg-N (CH3) O (CH3);
Ac-Tyr-< (CH2NH)> Ile-Arg-Leu-Pro-NH2(SEQ ID NO: 5);
AC-Tyr-Ile-Arg-NH-CH2(4-püridüül);
Ac-Tyr-Ile-< (CH2NH)> - Arg-Leu-Pro-NH2(SEQ ID NO: 6);
Ac-Tyr-Chg-Arg (NO2) -< (CH2NH)> - Leu-NH2(SEQ ID NO: 7);
Ac-Tyr-Ile-Arg-< (COCH2)> - Gly-Pro-NH2(SEQ ID NO: 8);
Ac-Tyr-Ile-Dab (N-C3H7N) Leu-Ala-NH2(SEQ ID NO: 9);
Ac-Tyr-Ile-PalMe (3) -NH2;
Tyr-Ile-Arg-NH2;
D-Tyr-Ile-Arg-Leu-Pro-NH2;
Ac- (Bzl) Gly- (Chx) Gly- (3-guanidopropüül) Gly-NH2;
Tsüklo (Gly-Tyr-Ile-Arg-Gly) (SEQ ID NO: 10);
Tfa- (iBu) Tyr-Chg-Arg-Leu-Pro-NH2(SEQ ID NO: 11);
Ac-pAph-Chg-Arg-Leu-Pro-NH2(SEQ ID NO: 12);
Ac-Nal (2) -Chg-Arg-Leu-Pro-NH2(SEQ ID NO: 13);
Ac-pAph-Chg-PalMe-NH2.

26. Mitteloodusliku päritoluga ühend, mis on valitud rühmast, sealhulgas
Ac-Y-I-R-L-A-NH2(SEQ ID NO: 290);
Ac-Y-I-r-L-P-NH2(SEQ ID NO: 149);
Ac- (iBu) -Y-I-R-L-P-NH2(SEQ ID NO: 94);
Ac-Y-I-R-N- (CH3) O (CH3);
Ac-Y-< (CH2NH)> - I-R-L-P-NH2(SEQ ID NO: 135);
AC-Y-I-R-NH-CH2(4-püridüül);
Ac-Y-I-< (CH2NH)> -R-L-P-NH2(SEQ ID NO: 141);
Ac-Y-Ghg-R (NO2)< (CH2NH)> - L-NH2(SEQ ID NO: 131);
Ac-Y-I-r-< (COCH2)> - G-P-NH2(SEQ ID NO: 136);
Ac-Y-I-Dab (N-C3H7N) -L-A-NH2(SEQ ID NO: 137);
Ac-Y-I-PalMe (3) -NH2;
Y-I-R-NH2;
D-Y-I-R-L-P-NH2;
Ac- (Bzl) Gly- (Chx) Gly- (3-guanidopropüül) Gly-NH2;
Tsüklo (G-Y-I-R-G) (SEQ ID NO: 183);
Tfa- (iBu) Y-Chg-R-L-P-NH2(SEQ ID NO: 221);
Ac-pAph-Chg-R-L-P-NH2(SEQ ID NO: 122) ja
Ac-Nal (2) -Chg-R-L-P-NH2(SEQ ID NO: 119).

27. Teguri Xa aktiivsuse spetsiifilise inhibeerimise meetod, mis seisneb faktori Xa kokkupuutes nõudluspunkti 1 kohase ühendiga.

28. Meetod vere hüübimise inhibeerimiseks indiviidis, mis hõlmab nõudluspunktile 1 vastava ühendi manustamist nimetatud indiviidile.